系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞的体外扩增及鉴定

目的：探讨系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞的体外培养方法、生物学功能、表面标记表达的异常与否。方法：选择2004—12/2005—12于南京医科大学第一附属医院风湿科初诊为系统性红斑狼疮患者5例，均为女性，年龄20～35岁，诊断符合美国风湿病学院（ARA）1997年修订的诊断标准，所有患者知情同意后，获取骨髓标本。采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离培养5例系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞，观察其形态学改变，测定其生长曲线，采用流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞表面标记物及分析细胞周期。结果：5例系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞均分离培养成功，其中1例因出现细菌污染而终止培养。①传代细胞生长较原代要快，细胞在8～10d即可达到90％融合。对P1、P2代细胞生长曲线进行观察，发现这2代细胞具有以下共同特征：传代培养的潜伏期为1～3d，第4天起呈对数增长，至第7天达到高峰，之后进入平台期。②流式细胞术检测问充质干细胞细胞表面抗原显示，细胞高表达CD105、CD13、CD90、CD73，而CD34、CD45、CD38、CD33阴性，3代以后的骨髓间充质干细胞纯度达到了95％以上，基本上排除了骨髓单个核细胞和巨噬细胞的污染。③间充质干细胞的周期分析显示，扩增后的间充质干细胞9．46％的细胞处于S，G2／M期，90．54％处于G0／G1期。结论：系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞体外可有效分离培养，所培养扩增的细胞成分单一，且保持干细胞特性，适于以后临床应用。

In vitro amplification and identification of bone marrow mesenchymal stem cells from patients with systemic lupus erythematosus