靶向调控的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3联合细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌的治疗作用

目的 观察人端粒酶逆转录酶启动子-二步转录增强系统调控下表达活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的重组腺病毒AdHTVP2G5-rev-casp3联合细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌(卵巢癌)的治疗作用.方法 应用活细胞计数法--细胞计数试剂盒8(CCK-8)、流式细胞仪和蛋白印迹法(western blot)检测AdHTVP2G5-rev-casp3联合flavopiridol作用后卵巢癌AO细胞的细胞存活率、凋亡率、细胞周期和细胞中活性caspase-3片段p17及其底物聚(腺苷二磷酸-核糖)多聚酶的裂解片段p85的表达情况;观测AdHTVP2G5-rev-casp3联合flavopiridol治疗前后荷卵巢癌裸鼠生存情况、移植瘤体积、肝酶水平及各器官组织的病理检查结果.结果 AdHTVP2G5-rev-casp3感染复数(MOI)=5～20]或flavopiridol(300 nmol/L)单独作用均不引起AO细胞的显著凋亡,凋亡率均＜11%;联合应用能产生显著的协同杀伤作用,当两者分别以MOI=20、300 nmol/L联合作用时,细胞存活率为11.6%,凋亡率为73.5%,该协同作用在AdHTVP2G5-rev-casp3感染细胞后72 h再加入flavopiridol作用48 h最为显著.低剂量(MOI=10)的AdHTVP2G5-rev-casp3能引起细胞的S期比例显著增高(62.5%).两者联合作用后的AO细胞中p17和p85的表达水平也显著高于两者单独作用时.单独应用AdHTVP2G5-rev-casp3或flavopiridol均可延长荷瘤裸鼠的生存时间分别为(141±14)、(134±10)d]并抑制肿瘤生长(抑瘤率分别为30%、40%),但两者联合应用具有协同作用,裸鼠生存时间可达(286±6)d,抑瘤率为81%.两者联合应用后裸鼠的肝酶水平无显著升高,肝等各器官组织的HE染色病理检查未见异常.结论 低剂量的活性caspase-3可引起卵巢癌细胞在S期的募集,从而增强细胞对flavopiridol的敏感性;低剂量的活性caspase-3联合flavopiridol对卵巢癌细胞具有显著的协同杀伤作用,能显著抑制移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的生存期,并降低flavopiridol对肝脏的毒性作用.

Synergism of antitumor effects on ovarian carcinoma using autocatalytic caspase-3 combined with flavopiridol