最适苦参碱浓度并用冻存保护剂对L-02人肝细胞系冻存保护的效应

目的：观察不同浓度剂量苦参碱与冻存保护剂联用对L-02人肝细胞系液氮冻存复苏后功能的影响，探索一种适合肝细胞保存的新方法。方法：实验于2005—01／07在南方医科大学中心实验室进行。常规培养的L—02人细胞系用胰酶消化后，将收集的L-02人肝细胞系分别以6种不同的冻存液（10％二甲基亚砜、5％二甲基亚砜＋0mg／L苦参碱、5％二甲基亚砜＋0．2mg／L苦参碱、5％二甲基亚砜＋2mg／L苦参碱、5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱、5％二甲基亚砜＋10mg／L苦参碱）在液氮中冷冻保存1个月。1个月后快速复苏L-02人肝细胞系，进行存活率、形态学及功能检测。结果：03复苏后L-02人肝细胞系的活存率5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱组明显高于其他处理组[胰酶刚消化的细胞活率为（96．2&;#177;1．4）％，10％二甲基亚砜组（76．6&;#177;3．8）％，5％二甲基亚砜组（81．9&;#177;2．4）％，5％二甲基亚砜&;#177;0．2mg／L苦参碱组（81．6&;#177;2．4）％，5％二甲基亚砜＋2mg／L苦参碱组（84．7&;#177;2．8）％，5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱组（89．6&;#177;3．4）％，5％二甲基亚砜＋10mg／L苦参碱组（86．9&;#177;1．6）％，P〉0．051。②复苏后5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱组肝细胞完整性恢复快，肝细胞生长旺盛，细胞膜完整，胞浆内有丰富颗粒，核仁清楚，与未冻存组肝细胞形态相似。③复苏后L-02人肝细胞系培养上清液尿素含量、上清液白蛋白含量5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱组明显高于其他处理组，与对照组无显著差异。结论：①苦参碱对L-02人肝细胞液氮冻存有保护作用，6mg／L苦参碱是最好的浓度。②苦参碱、二甲基亚砜有协同作用，5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱联合冻存保护体系显著提高L-02人肝细胞系的冻存质量。

Effect of opitmal-concentration matrine combined with cryoprotectant on the cryopreservation of immortalized L-02 hepatocytes