反义RNA抑制Survivin在人骨肉瘤细胞系MG63中表达的实验研究

目的]研究人骨肉瘤细胞MG63中反义RNA对Survivin表达的抑制作用。方法]培养骨肉瘤细胞MG63，采用RT—PCR的方法克隆人Survivin基因编码区cDNA。构建Survivin的反义诱导表达载体。转染MG63细胞，G418筛选稳定转染的细胞系。稳定转染的细胞系，以ZnSO4 120μmol／L诱导，HE染色、Survivin免疫细胞化学染色透射电镜等形态学观察。绘制生长曲线。RT—PCR检测各组细胞Survivin的表达。Annexin V法检测细胞凋亡。结果]RT—PCR从MG63细胞mRNA扩增了Survivin编码区cDNA，约420bp。构建了pMDNA3-anti—Survivin重组质粒。转染MG63细胞，G4181000μg/ml筛选4周后，建成稳定转染细胞系。通过ZnSO4 120μmol／L诱导，电子显微镜观察可见MG63／pMDNA3-anti—Survivin细胞出现凋亡。免疫细胞化学染色可见诱导后的MG63／pMDNA3-anti—Survivin Survivin蛋白表达明显降低。AnnexinV染色后发现pMDNA3-anti—Survivin细胞，在ZnSO4诱导48h后凋亡率达到11％，较对照组高出3倍。结论]Survivin的反义RNA能够有效的抑制Survivin的表达，从而抑制肿瘤生长，并促进肿瘤细胞凋亡．

Inhibition of the expression of Survivin in human osteosarcoma cell line MG63 by specific antisense RNA