| RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达 |
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| 引用本文： | 张慧,范列英,卢天宝,宗明,吕红根,杨蔺.RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达[J].中国免疫学杂志,2008,24(11). |
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| 作者姓名： | 张慧 范列英 卢天宝 宗明 吕红根 杨蔺 |
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| 作者单位： | 上海同济大学附属东方医院检验科,上海,200120 |
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| 基金项目： | 上海市卫生局资助项目
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| 摘 要： | 目的：设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础。方法：设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析。以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析。结果：经Acc65Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒；转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果最优,干扰效率达到62%。结论：成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率最好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础。
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| 关 键 词： | PADI-4基因 SiRNA RNA干扰 HL-60细胞系 |
The expressive vector of RNA interference can effect the expressions of PADI-4 gene in HL-60 cells |
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| ZHANG Hui,FAN Lie-Ying,LU Tian-Bao,ZONG Ming,LU Hong-Gen,YANG Lin.The expressive vector of RNA interference can effect the expressions of PADI-4 gene in HL-60 cells[J].Chinese Journal of Immunology,2008,24(11). |
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| Authors: | ZHANG Hui FAN Lie-Ying LU Tian-Bao ZONG Ming LU Hong-Gen YANG Lin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SiRNA |
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