TGF-β_1mRNA荧光实时定量PCR检测初筛方法的建立及初步运用

目的:建立荧光实时定量检测人转化生长因子异构体(TGF-β1)mRNA的方法。方法:抽取外周静脉血,予EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,在扩增体系中加入SYBRGreenⅠ,应用FQ-RT-PCR定量检测TGF-β1mRNA。结果:该法检测TGF-β1mRNA的灵敏度达105拷贝/ml,线性范围为105～1011拷贝/ml,Ct值的批内、批间变异系数分别为2.27%～2.56%和4.78%～5.22%。临床应用显示,糖尿病患者PBMC中TGF-β1mRNA的含量显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:FQ-RT-PCR应用于检测TGF-β1mRNA的初筛方法具有简便、快速等特点,为临床应用提供了方法学依据。