| CYP2B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 张宝,霍霞,徐锡金,齐宗利,郑谨,彭琳.CYP2B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达[J].汕头大学医学院学报,2007,20(1):1-4. |
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| 作者姓名： | 张宝 霍霞 徐锡金 齐宗利 郑谨 彭琳 |
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| 作者单位： | 1. 汕头大学医学院共聚焦实验室,广东省免疫病理学重点实验室,广东,汕头,515041;南方医科大学生物化学教研室,广东,广州,515015
2. 汕头大学医学院共聚焦实验室,广东省免疫病理学重点实验室,广东,汕头,515041 |
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| 基金项目： | 中国博士后科学基金;国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建CYP2 B6基因原核表达质粒,在大肠杆菌Rosetta2(DE3)pLysS]中高效表达重组蛋白。方法:以质粒为模板,用PCR技术扩增出CYP2 B6基因,并将其分别插入pET-22b( )、pET-28b( )和pET-32a( )质粒中,经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta2(DE3)pLysS,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:经PCR、测序鉴定,构建了CYP2 B6基因表达质粒;采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达,pET-22b( )-CYP2 B6未见目的蛋白表达;pET-28b( )-CYP2 B6有目的蛋白表达,约占蛋白总量的5%;而pET-32a( )-CYP2 B6可以高效地表达CYP2 B6,在低浓度(50μmol/L)IPTG诱导3 h后,所表达的CYP2 B6蛋白约占细菌总蛋白的30%;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为CYP2 B6。结论:成功地使CYP2 B6基因在原核系统中高效表达。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 表达 |
| 文章编号： | 1007-4716（2007）01-0001-04 |
| 收稿时间： | 2006-11-29 |
| 修稿时间： | 2006-11-29 |
Construction of Recombinant Prokaryotic Expression Plasmids of CYP2B6 Gene and Expression in Escherichia coli |
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| ZHANG Bao,HUO Xia,XU Xi-jin,QI Zong-li,ZHENG Jin,PENG Lin.Construction of Recombinant Prokaryotic Expression Plasmids of CYP2B6 Gene and Expression in Escherichia coli[J].Journal of Shantou University Medical College,2007,20(1):1-4. |
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| Authors: | ZHANG Bao HUO Xia XU Xi-jin QI Zong-li ZHENG Jin PENG Lin |
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| Institution: | 1 Confocal Laboratory, Key lmmunopathology Laboratory of Guangdong Province, Shantou University Medical College, 515041, China; 2 Department of Biochemistry, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CYP2B6 |
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