| TGFβ1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 王翔,胡治平,卢伟,唐湘祁,张洁,李婷,曾六旺.TGFβ1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J].重庆医科大学学报,2009,34(1). |
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| 作者姓名： | 王翔 胡治平 卢伟 唐湘祁 张洁 李婷 曾六旺 |
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| 作者单位： | 湖南省长沙市中南大学湘雅二医院神经内科,长沙,410011 |
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| 摘 要： | 目的:构建TGFβ1基因RNAi慢病毒载体.方法:根据人TCFβ1的mRNA序列选择3个靶序列并根据它们设计合成3对寡核苷酸序列.同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上4对寡核苷酸序列退火后连人pRNA-U6/Lenti质粒,酶切和测序鉴定后,将以上质粒分别和包装质粒混合物共转染293FT细胞,包装产生病毒颗粒.各组病毒载体转染Hela细胞后,运用Real-Time PCR和ELISA检测TGFβ lmRNA和蛋白的表达水平.结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pRNA-U6/Lenti质粒;各质粒与包装质粒共转染293FT细胞后能产生高滴度的慢病毒载体颗粒;各组慢病毒载体感染Hela细胞后,有两组可以显著抑制TGFβ1mRNA水平及蛋白水平的表达,其中以第一组效果最佳.结论:成功构建了人TGFβ1基因RNAi慢病毒载体.
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| 关 键 词： | TGFβ1 慢病毒载体 |
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