| 创伤弧菌PMA RTi-PCR检测技术的建立 |
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| 引用本文： | 张晶,周勇,陶霞,吴新伟. 创伤弧菌PMA RTi-PCR检测技术的建立[J]. 中国人兽共患病杂志, 2013, 29(1): 54-58 |
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| 作者姓名： | 张晶 周勇 陶霞 吴新伟 |
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| 作者单位： | 广州市疾病预防控制中心微生物检验科 |
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| 基金项目： | 广州市医药卫生科技项目(201102A213240)资助~~ |
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| 摘 要： | 目的将叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时定量聚合酶链式反应(RTi-PCR)技术相结合,建立以一种快速准确的创伤弧菌检测方法。方法以vvh基因作为检测创伤弧菌的靶基因,用PMA对样品基因组提取进行前处理,抑制该DNA分子的RTi-PCR扩增。结果终浓度为3.0mg/L的PMA可有效抑制死细胞(1×108 CFU/mL)DNA的扩增;当PMA浓度小于或等于5.0mg/L时,对创伤弧菌DNA的扩增没有显著的影响;含有不同比例死活细菌的创伤弧菌混合液RTi-PCR结果表明,PMA RTi-PCR能选择性定量创伤弧菌中的活菌。纯培养创伤弧菌活细胞的检测灵敏度检测极限为2.5×101 CFU/mL,并且Ct值与细胞数的对数呈良好的线性关系,相关系数R2值为0.9982。结论 PMA RTi-PCR是一种快速灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法。
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| 关 键 词： | 创伤弧菌 PMA RTi-PCR 死活细菌 |
Establishment of PMA RTi-PCR detection method for Vibrio vulnificus |
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| ZHANG Jing,ZHOU Yong,TAO Xia,WU Xin-wei. Establishment of PMA RTi-PCR detection method for Vibrio vulnificus[J]. Chinese Journal of Zoonoses, 2013, 29(1): 54-58 |
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| Authors: | ZHANG Jing ZHOU Yong TAO Xia WU Xin-wei |
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| Affiliation: | (Guangzhou Center for Diseases Control and Prevention,Guangzhou510440,China) |
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