| 摘 要： | 目的观察金钗石斛生物碱(ADNL)对谷氨酸诱导的大鼠海马神经元轴突变性的保护作用,并探讨该保护作用与影响细胞自噬的关系。方法体外培养的大鼠海马神经元被随机分为对照组、模型组、ADNL(3.5、35、350μg·L~(-1)组、ADNL(350μg·L~(-1)+3~(-1)甲基腺嘌呤(3MA,1 mmol·L~(-1)或羟氯喹(HCQ,50μmol·L~(-1)组。谷氨酸(50μmol·L~(-1)诱导神经元轴突变性,βⅢTubulin免疫荧光观察轴突变性形态学改变并作定量分析,MTT比色法检测细胞活力,神经元过表达GFP~(-1)LC3B观察自噬体数量的变化,DQ~(-1)RED~(-1)BSA检测自噬体的降解,Western blot检测突触后密度蛋白~(-1)95(PSD95)、突触素(SYN)、LC3BⅠ、LC3BⅡ和p62蛋白水平。结果谷氨酸可诱导大鼠海马神经元轴突变性,变性指数显著增高,细胞活力、PSD95和SYN蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01),除ADNL(3.5μg·L~(-1)对变性指数(72 h)、细胞活力和SYN蛋白水平未见显著影响(P>0.05)外,谷氨酸诱导的上述各指标的改变均被ADNL显著抑制,而且ADNL(350μg·L~(-1)对轴突变性的保护作用可被自噬抑制剂3MA拮抗。在谷氨酸诱导的轴突变性神经元中GFP~(-1)LC3B荧光斑点数量减少(P<0.01)、LC3BⅡ/LC3BⅠ比值降低(P<0.01),p62降解受阻(P<0.01),表明自噬功能被抑制。不同浓度的ADNL均可增加GFP~(-1)LC3B荧光斑点数量,增高LC3BⅡ/LC3BⅠ比值,促进p62和DQ~(-1)RED~(-1)BSA降解,其中对GFP~(-1)LC3B荧光斑点的影响呈浓度依赖性。ADNL(350μg·L~(-1)对自噬功能的影响可被自噬抑制剂3MA或HCQ拮抗。结论 ADNL通过激活自噬改善谷氨酸诱导的大鼠海马神经元轴突变性。
|
