survivin启动子调控siRNA真核表达载体的构建及对HeLa细胞中stathmin基因的干涉作用

目的：探讨survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体对HeLa细胞中stathmin基因表达的肿瘤特异性封闭作用。方法：合成针对人stathmin基因的siRNAcDNA寡核苷酸链退火形成双链，连接入经BamHI和HindIII双酶切后的pSilencer4．1-CMVneo真核表达载体。PCR扩增suvivin基因启动子并测序，用EcoRI和BamHl分别双酶切，连接至经相同内切酶消化的载体，获得survivin启动子调控的siRNA真核表达载体，酶切及测序鉴定。脂质体法转染重组质粒人HeLa细胞，G418筛选。RT-PCR扩增stathmin基因，检测其对stathmin基因表达的干涉效果；流式细胞仪分析转染后HeLa细胞增殖周期的改变。结果：经酶切及测序鉴定，成功构建重组质粒；RT—PCR结果显示所构建的干涉载体可有效封闭stathmin基因表达；流式细胞仪分析结果显示，Hale细胞在stathminsiRNA作用下G2／M期细胞的比例明显增加。结论：survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体可有效地封闭HeLa细胞中stathmin基因表达并使HeLa细胞阻断于G2／M期，为以stathmin基因为靶点的恶性肿瘤生物治疗奠定了理论基础。