| 乳糖诱导瑞替普酶在大肠杆菌中的可溶性表达 |
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| 引用本文： | 田文静,罗学刚,吕丽慧,倪萌,井晓兰,张同存.乳糖诱导瑞替普酶在大肠杆菌中的可溶性表达[J].中国生化药物杂志,2011,32(5). |
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| 作者姓名： | 田文静 罗学刚 吕丽慧 倪萌 井晓兰 张同存 |
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| 作者单位： | 1. 天津科技大学,生物工程学院,工业微生物教育部重点实验室,天津,300457
2. 武汉科技大学医学院,湖北,武汉,430065;天津市工业微生物重点实验室,天津,300457 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)(NO.2008AA10Z336) |
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| 摘 要： | 目的构建瑞替普酶(rPA)大肠杆菌基因工程菌,优化乳糖诱导表达条件,并获得活性重组蛋白。方法通过PCR扩增得到rPA编码基因,将该基因片段克隆到载体pET40b中,转化E.coli BL21。优化确定乳糖诱导浓度、时间、温度等参数,将诱导表达后获得的菌体细胞通过超声破碎裂解后利用镍柱亲和色谱进行分离纯化,重组目的蛋白经Xa因子切割去除DsbC融合标签后释放获得rPA产物,最后利用纤维蛋白平板法对其溶栓活性进行检测。结果 rPA重组质粒构建成功,利用终浓度30 mmol/L的乳糖于30℃诱导5 h可以获得很好的表达效果,重组蛋白的表达量、可溶性及酶活与IPTG诱导产物基本接近;经纯化后的rPA目的蛋白可表现出明显的溶栓活性。结论本研究为进一步利用大肠杆菌系统表达生产高活性重组rPA提供了一定的参考依据。
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| 关 键 词： | 瑞替普酶 DsbC 乳糖 大肠杆菌 表达 |
Soluble expression of Reteplase in E.coli induced by lactose |
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| TIAN Wen-jing,LUO Xue-gang,LU Li-hui,NI Meng,JING Xiao-lan,ZHANG Tong-cun.Soluble expression of Reteplase in E.coli induced by lactose[J].Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics,2011,32(5). |
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| Authors: | TIAN Wen-jing LUO Xue-gang LU Li-hui NI Meng JING Xiao-lan ZHANG Tong-cun |
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| Institution: | TIAN Wen-jing1,LUO Xue-gang1,LU Li-hui1,NI Meng1,JING Xiao-lan1,ZHANG Tong-cun2,3(1.Key Laboratory of Industrial Microbiology,Ministry of Education,School of Bioengineering,Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457,China,2.School of Medicine,Wuhan University of Science and Technology,Wuhan 430065,3.Tianjin Key Laboratory of Industrial Microbiology,China) |
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| Abstract: | Purpose To establish the genetic E.coli for Reteplase,and to optimize the expression conditions induced by lactose.Methods The coding sequence of Reteplase(rPA) was amplified with PCR and then cloned into the pET40b vector.To achieve the high-level expression of soluble active reteplase,the induction expression conditions in E.coli strain BL21,including the concentration of inducer lactose,induction duration and temperature,were optimized.The thrombolytic activity of the recombinant K2S was finally determin... |
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| Keywords: | Reteplase DsbC lactose E coli expression |
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