新型大肠杆菌融合表达系统表达水蛭素Ⅲ基因研究 |
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引用本文: | 谭树华,吴梧桐.新型大肠杆菌融合表达系统表达水蛭素Ⅲ基因研究[J].中国生化药物杂志,1999,20(1):10-12. |
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作者姓名: | 谭树华 吴梧桐 |
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作者单位: | 中国药科大学生物制药教研室!南京,210009,中国药科大学生物制药教研室!南京,210009,中国药科大学生物制药教研室!南京,210009 |
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摘 要: | 选用大肠杆菌L-门冬酰胺酶(ASPsⅡ)高效表达质粒pKA作为融合表达载体,将水蛙素Ⅲ(HV3)人工合成编码基因插入 pKA质粒的 ASPsⅡ编码基因 ansB中,使 ASPs Ⅱ1N端的 89个氨基酸残基通过甲硫氨酸残基与 HV3形成融合蛋白,从而构建成 ASPsⅡ-HV3融合蛋白表达质粒 pKAH,通过基因操作将该质粒的低拷贝数复制原长更换成 pUC高拷贝数复制原点,进而构建成ASPsⅡ-HV3融合蛋白高效表达载体 pUKAH。该质粒在大肠杆菌 JM105宿主细胞中表达后,融合蛋白(15. 6 kD)占细菌总蛋白 10 5%,该融合蛋白经 CNBr切割释放出活性水蛭素分子,抗凝血活力达约 20 ATU/ml培养液,为以后进一步研究打下了基础。
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关 键 词: | 融合表达 水蛭素Ⅲ |
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