摘 要: | 选用大肠杆菌L-门冬酰胺酶(ASPsⅡ)高效表达质粒pKA作为融合表达载体,将水蛙素Ⅲ(HV3)人工合成编码基因插入 pKA质粒的 ASPsⅡ编码基因 ansB中,使 ASPs Ⅱ1N端的 89个氨基酸残基通过甲硫氨酸残基与 HV3形成融合蛋白,从而构建成 ASPsⅡ-HV3融合蛋白表达质粒 pKAH,通过基因操作将该质粒的低拷贝数复制原长更换成 pUC高拷贝数复制原点,进而构建成ASPsⅡ-HV3融合蛋白高效表达载体 pUKAH。该质粒在大肠杆菌 JM105宿主细胞中表达后,融合蛋白(15. 6 kD)占细菌总蛋白 10 5%,该融合蛋白经 CNBr切割释放出活性水蛭素分子,抗凝血活力达约 20 ATU/ml培养液,为以后进一步研究打下了基础。
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