犬骨髓间叶干细胞的分离培养和生物学特性

目的 建立犬骨髓间叶干细胞的体外分离、培养、扩增与鉴定方法，了解其生物学特性，为心肌梗死、心力衰竭及缓慢性心律失常的干细胞移植提供细胞材料。方法 抽取犬骨髓液10ml，以DMEM1：1稀释，用1.063g／ml percoll密度分离液，以600g离心力、30min分离骨髓单个核细胞；以LG-DMEM及10% FBS添加100U／ml青霉素，100μg／ml链霉素，25μg／ml两性霉素B培养骨髓干细胞；利用细胞贴壁筛选法分离、培养、扩增骨髓间叶干细胞；应用干细胞表面标志蛋白检测，诱导剂诱导分化间叶组织细胞等方法进行犬骨髓间叶干细胞的鉴定。结果 分离出的犬骨髓单个核细胞约占细胞总数的10^-4～10^-6，在LG-DMEM与选择性血清培养基上生长良好。犬骨髓间叶干细胞孵育24h即可见细胞贴壁生长，贴壁细胞约占接种单个核细胞总数的10^-6。犬骨髓间叶干细胞增殖分裂迅速，38～48h内增殖多个细胞，约72h即可增殖形成大的细胞克隆，7～1Od即可布满瓶底。细胞融合时类似成纤维细胞，呈纺锤状，细胞小而密集，螺旋梳状排列。连续培育10代以上，未见细胞形态、增殖特性发生改变。未见骨髓间叶干细胞自发分化其它类型细胞，仍维持原代培养细胞的增殖特性。犬骨髓间叶干细胞的表面标志SH2阳性，CD45则阴性。在化学诱导液的作用下，犬骨髓间叶干细胞能定向分化为心肌细胞、脂肪细胞、成骨细胞等多种间叶组织类型细胞。结论 密度梯度分离法与贴壁筛选法能较好地进行犬骨髓间叶干细胞的体外分离、培养与扩增，犬骨髓间叶干细胞具备易于分离培养，巨大增殖潜力，独特细胞表型，多系分组能力等细胞生物学特性。为心肌梗死、心力衰竭与心律失常的细胞移植修复治疗提供了理想细胞材料。

Biological and cellular features of mesenchymal stem cells from canine bone marrow