| 利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白 |
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| 引用本文： | 何乐亚,魏欣,徐丰,闵江,刘鹭,李国东,傅寅佳,陶德定,胡俊波,龚建平.利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白[J].华中科技大学学报(医学版),2012,41(5):534-536,540. |
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| 作者姓名： | 何乐亚 魏欣 徐丰 闵江 刘鹭 李国东 傅寅佳 陶德定 胡俊波 龚建平 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家“973”计划资助项目(No.2009CB521802);国家自然科学基金资助项目(No.81171927,30872472,30973496,30800569) |
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| 摘 要： | 目的 利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1 (Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白.方法 加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1.将未诱导和用四环素诱导48 h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(mass spectrometry,MASS)行蛋白鉴定.结果 用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8 isoform 1).结论 除Cyclin B1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用.
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| 关 键 词： | 细胞周期素B1 四环素 免疫沉淀 质谱 |
Finding Proteins Interacting with Cyclin B1 Using Monoclone Cell Line Expressing Cyclin B1 Induced by Tetracycline |
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| Institution: | He Leya,Wei Xin,Xu Feng et al Department of Gastrointestinal Surgery,Tongji Hospital,Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China |
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