鬼臼毒素-固体脂质纳米粒的皮肤毒理学实验

目的:考察鬼臼毒素-固体脂质纳米粒经皮肤用药的安全性。方法:实验于2005-12/2006-11在南方医科大学药学部实验室完成。选择Wistar大鼠140只,Fmmu豚鼠78只。采用改良的乳化蒸发-低温固化法制备5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒。①取豚鼠48只,按随机数字表法分成5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒完整皮肤组和破损皮肤组,每组4只,分别进行单次和多次给药皮肤刺激试验。单次给药方法:豚鼠背部两侧对称脱毛后用手术刀片作#字划痕,以渗血为度。采用同体左右侧自身对照法,左侧为受试区,分别取5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒混悬液0.1mL均匀涂布于受试区,右侧为空白对照区,再以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区。分别于去除敷料和清洗受试物后1,24,48h观察涂药部位有无红斑和水肿等情况,以及上述变化的恢复情况与时间。多次给药方法:皮肤处理方法、观察指标及评价指标同上,每日给药1次,连续给药14d。②取大鼠140只,按随机数字表法分成5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒完整皮肤组和破损皮肤组、正常对照组,每组10只,分别进行急性和长期皮肤毒性试验。急性毒性试验方法:脱毛后,分别取5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒混悬液1mL均匀涂布于受试区,连续观察14d,每日观察大鼠体质量、进食量、皮肤、呼吸、体态、眼、中枢神经系统、四肢活动、粪便性状及死亡情况。长期毒性实验方法:皮肤处理方法及观察指标同上,每日给药1次,药量均为0.1mL,连续给药30d,末次给药后24h麻醉后处死动物,取血3￣4mL进行血液学、血液生化学及皮肤病理检查。③取豚鼠30只,按随机数字表法分成50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组、阴性对照组及阳性对照组,每组10只,进行皮肤变态反应试验。方法:脱毛后,3组左侧脱毛区分别涂50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒混悬液、空白固体脂质纳米粒混悬液及10g/L二四二硝基氯苯0.1mL,涂药后以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区,6h后去除敷料和清洗受试物。第7天和第14天,以同样方法各重复1次,共3次。于末次给受试物致敏后14d,将受试物0.1mL涂于豚鼠背部右侧脱毛区,6h后去掉受试物,即刻观察皮肤变态反应情况,之后于24,48,72h再次观察皮肤反应。结果:纳入大鼠140只,豚鼠78只,均进入结果分析。①单次和多次给予鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠完整和破损皮肤均无刺激作用。②单次大剂量给予5mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒,未见对大鼠有急性毒性反应。给予50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组大鼠分别于给药后的前3,8d出现体质量减轻、食欲下降等全身中毒症状,尤以皮肤破损组表现较明显,以后逐渐恢复;每日小剂量给予5mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒,未见对大鼠有明显长期毒性反应。③给予50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组大鼠于给药后的18￣25d,均出现轻度的皮肤红斑、水肿、糜烂和结痂等炎症反应,于停药后1周内消退,皮肤组织病理学检查可见以表皮为主的急性炎症反应;鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠皮肤无致敏性。结论:在有效观察时间和一定质量浓度范围内,鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠皮肤无刺激性及致敏性,对破损皮肤大鼠应用50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒大剂量时易出现全身急性中毒反应而完整皮肤及5mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒应用则较安全,小剂量长期应用鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对大鼠比较安全无系统吸收毒性,但应用50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒时可以出现轻度的皮肤炎症反应。

Dermal toxicological experiment on podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles