| 幽门螺杆菌vacA-ctxB融合基因原核表达载体的构建 |
| |
| 引用本文： | 张任飞,杨致邦,周侠,夏丽君,李昌庆,陈瀑. 幽门螺杆菌vacA-ctxB融合基因原核表达载体的构建[J]. 重庆医科大学学报, 2009, 34(1) |
| |
| 作者姓名： | 张任飞 杨致邦 周侠 夏丽君 李昌庆 陈瀑 |
| |
| 作者单位： | 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室,重庆,400016;成都市核工业四一六医院检验科,成都,610051;成都市第六人民医院检验科,成都,610051;重庆医科大学附属第一医院检验科,重庆,400022 |
| |
| 摘 要： | 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)致细胞空泡毒素抗原(Vauolating cytotoxin antigen A,vaeA)毒性片段与霍乱毒素(Cholerae toxin,Ctx)B亚单位(ctxB)基因的原核表达载体,为进一步表达VCTB重组蛋白,制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础.方法:通过比较国内H.pylori代表株的vacA基因毒性亚单位,找出高度同源性片段,按基因文库中提供的vacA基因和ctxB基因序列设计引物.以H.pylori基因组DNA为模板,PCR扩增vaeA毒性片段基因,克隆至质粒pQE30中,获得重组质粒pQE30-vacA.以pET32(α)+-ctxB质粒为模板PCR扩增ctxB目的基因.再将纯化的ctxB基因片段插入pQE30-vacA中,构建含双基因的表达质粒pQE-vctB,构建的表达质粒pQE-vctB转化大肠杆菌Top10,培养后,提取纯化重组质粒pQE-vctB,内切酶双酶切鉴定.结果:扩增的vacA DNA片段约为723 bp,ctxB基因的DNA片段约为372bp,与预计长度相符合.构建的表达质粒pQE-vctB酶切鉴定,与插入pQE30的目的基因片段相符.测序结果vctB融合基因由1092bp组成,编码364个氨基酸残基的多肽,与基因文库相符.结论:含vacA和ctxB融合基因的原核表达载体构建成功,为进一步表达VCTB重组蛋白奠定了基础.
|
| 关 键 词： | 幽门螺杆菌 细胞空泡毒素 霍乱毒素B亚单位 载体 |
Construction of vacA-ctxB prokaryotic expression vectors to Helicobacter pylori |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
