解毒通络生津方对干燥综合征NOD小鼠PD-1/PD-L1信号通路的影响＊

目的 观察解毒通络生津方对干燥综合征（SS）模型NOD小鼠PD-1/PD-L1通路的影响,探讨其作用机制。方法 将24只8周龄雌性NOD小鼠随机分为3组,即模型组（Model）、解毒通络生津方组（TCM）、解毒通络生津方加抗PD-L1单抗阻断组（TCM＋α-PD-L1）,每组8只。另选8只8周龄雌性ICR小鼠作为正常对照组（Ctrl）。12周龄时开始中药干预,TCM组按照每天24.4 g·kg^-1解毒通络生津方灌胃,TCM＋α-PD-L1组在每天给予24.4 g·kg^-1解毒通络生津方灌胃的基础上,腹腔注射抗PD-L1抗体,1周2次,每次100 μg,Ctrl组和Model组给予同等剂量的生理盐水灌胃,实验期间记录各组小鼠第9、12、16、20周龄时的日均饮水量,干预8周后,小鼠统一麻醉下摘取颌下腺。HE染色观察各组小鼠颌下腺中炎症细胞浸润情况;流式细胞仪检测小鼠颌下腺CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg细胞的表达;Western Blot检测小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达。结果 随着小鼠周龄的增长,Ctrl组小鼠日均饮水量基本不变,Model组小鼠的日均饮水量有明显上升趋势,TCM组小鼠日均饮水量下降,TCM＋α-PD-L1组小鼠日均饮水量上升;与Model组比较,TCM组炎症细胞浸润灶明显减少（P<0.001）;与TCM组比较,TCM＋α-PD-L1组炎症细胞浸润增多（P<0.001）;与Ctrl组比较,Model组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg的表达降低（P<0.001）,与Model组比较,TCM组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg表达升高（P<0.01）;与TCM组比较,TCM＋α-PD-L1组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg的表达降低（P<0.01）;与Ctrl组比较,Model组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达降低（P<0.01）;与Model组比较,TCM组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达升高（P<0.01）;与TCM组比较,TCM＋α-PD-L1组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达降低（P<0.001）。结论 解毒通络生津方可能通过PD-1/PD-L1信号通路促进SS模型小鼠Treg细胞活化,上调Foxp3的表达,增强Treg细胞抑制免疫炎症的作用,PD-1/PD-L1可能是解毒通络生津方治疗SS的一个作用靶点。

Effect of Jiedu Tongluo Shengjin Recipe on PD-1/PD-L1 signal Pathway in NOD mice with Sjogren's syndrome