温阳解郁颗粒调节BDNF/TrkB/ERK信号通路保护皮质酮诱导损伤型海马神经细胞的作用机制研究＊

目的 观察温阳解郁颗粒（Wenyang Jieyu granule,WYJY）对皮质酮（Corticosterone,CORT）诱导损伤型小鼠海马神经细胞（TH22 cell）的保护作用,基于脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor, BDNF）/酪氨酸激酶B（Tyrosine kinase B, TrkB）/细胞外信号调节蛋白激酶（Extra cellular regulated protein kinases, ERK）信号通路探讨WYJY保护海马神经细胞的作用机制。方法 体外构建小鼠海马神经细胞皮质酮诱导损伤模型,以不同浓度的WYJY和氟西汀（Fluoxetine,FXT）含药血清作用于模型细胞,细胞增殖-毒性检测（Cell Counting Kit-8, CCK-8）法分析细胞活性,倒置显微镜下观察给药前后细胞形态结构的改变,采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）、实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR, qPCR）法检测神经细胞内凋亡因子（BCL2-Associated X, Bax）、抗凋亡因子（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、BDNF、Trkb、ERK以及丝氨酸/苏氨酸激酶（Phospho-p90RSK, RSK）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein, CREB）蛋白表达水平以及相关基因的表达水平。结果 在浓度为459.5 μmol·L^-1的CORT作用24 h后,HT22细胞的活性抑制率达到50%,在此条件作用下细胞形态结构损伤明显,凋亡程度严重,细胞上清中BDNF的含量显著减少（P<0.05）,细胞内凋亡相关因子Bax/Bcl-2的比值明显升高（P<0.01）,BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;以5%的浓度为2.85 g·kg^-1的WYJY和10%的FXT含药血清作用于受损的HT22细胞后,HT22细胞存活率明显提升（P<0.01）,细胞结构的损伤明显改善,细胞凋亡程度减轻,细胞外BDNF的含量显著升高（P<0.05）,细胞内Bax/Bcl-2比值显著下调（P<0.01）,BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平显著提升（P<0.05,P<0.01）。结论 温阳解郁颗粒可有效保护高浓度CORT造成的小鼠海马神经细胞损伤。调控BDNF/Trkb/ERK通路,放大CREB信号传导,影响Bcl-2、BDNF水平,可能是其保护海马神经元,发挥抗抑郁疗效的重要机制。

The Mechanism of Wenyang Jieyu Granule Adjust the BDNF/TrkB/ERK Signaling Path to Protect Corticosterone Damaged Hippocampal Nerve Cells