黄连活性成分药根碱干预T790M突变EGFR-TKIs耐药非小细胞肺癌的机制研究＊基于网络药理学及实验验证

目的 通过网络药理学及分子对接技术预测黄连活性成分药根碱（Jatrorrhizine）干预表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs）耐药非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的效果及作用机制,运用体外细胞学实验进行验证。方法 通过Swiss Target Prediction数据库、PharmMapper数据库、TCMSP数据库及PubMed数据库获得黄连活性成分药根碱的潜在靶标,使用OMIM、Gene Cards及DisGeNET数据库收集非小细胞肺癌相关基因,经人工检查剔除假阳性基因后通过Venn工具获取药根碱和非小细胞肺癌的交集基因,通过PubMed数据库进一步验证靶标后导入STRING数据库,构建蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络,通过Cytoscape软件进行拓扑分析,通过DAVID数据库进行GO富集分析及KEGG通路分析,通过KEGG PATHWAY数据库比对药根碱靶标与EGFR-TKIs耐药通路之间的关系,预测药根碱干预EGFR-TKIs耐药非小细胞肺癌的直接作用靶标及靶通路。借助Auto Dock软件进行分子对接验证,PyMol软件进行可视化。采用EGFR-TKIs耐药非小细胞肺癌细胞模型H1975细胞系（即T790M突变EGFR-TKIs耐药非小细胞肺癌细胞系）进行细胞学实验,通过CCK-8初步考察药根碱对H1975细胞增殖能力的影响,采用蛋白质印迹法（Western blot,WB）验证药根碱对H1975细胞中部分关键靶蛋白的调控作用。结果 共获得药根碱靶标328个,非小细胞肺癌疾病基因3965个,药根碱与疾病交集基因69个,有7个核心靶基因为EGFR-TKIs耐药通路相关基因,富集分析显示PI3K-Akt信号通路为重要靶通路,分子对接结果表明药根碱与PI3K及mTOR之间均有较好的结合活性。药根碱可下调靶蛋白PI3K和mTOR的磷酸化,促进H1975细胞凋亡（P<0.01）。结论 黄连活性成分药根碱可能通过PI3K-Akt信号通路发挥抗T790M突变EGFR-TKIs耐药非小细胞肺癌的效用。