新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂对缺氧损伤心肌细胞的保护作用研究

目的：利用化学发光方法和细胞筛选模型，检测新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂（ histone deacetylase inhibitor， HDACi）JZ005的抑制组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases，HDACs）的活性；建立氯化钴损伤的心肌细胞缺氧模型，初步探讨JZ005对缺氧损伤细胞的保护作用。方法采用脂质体转染法将含有p21启动子元件的荧光素酶报告基因真核表达载体pCI-p21-Luc转入到人胚肾细胞293中，用G418筛选获得稳定转染荧光素酶报告基因的单克隆细胞系；采用已报道的HDACi曲古抑菌素A（ trichostatina A，TSA）为阳性对照，检测细胞筛选模型的稳定性；用HDACi化学发光检测试剂盒及上述细胞筛选模型测定JZ005抑制HDACs的活性；用不同浓度的JZ005处理氯化钴缺氧损伤的大鼠胚胎心肌细胞（H9c2），MTT法检测JZ005对缺氧损伤细胞的保护作用。免疫印迹法检测JZ005处理后正常及缺氧损伤心肌细胞组蛋白H3的乙酰化水平变化。流式细胞术检测JZ005对H9c2细胞缺氧损伤后凋亡的影响。结果建立含p21启动子元件荧光素酶报告基因的HDACi细胞筛选模型；JZ005能够显著抑制HDACs的活性，浓度50～400μmol／L，抑制率＞50％。对缺氧损伤的心肌细胞具有明显保护作用，与对照组相比，细胞存活率提高38．33％、56．00％和35．20％，同时能够上调缺氧损伤心肌细胞组蛋白H3的乙酰化水平，拮抗缺氧损伤心肌细胞的凋亡，细胞凋亡数目从对照组的12．89％分别下降到给药组（25，50和100μmol／L）的6．63％、10．56％和8．89％。结论成功建立了HDACi的细胞筛选模型；JZ005作为一种新型的HDACi ，具有明显的保护心肌细胞拮抗缺氧损伤的作用，提示JZ005有可能开发成一种治疗缺氧损伤的药物。

Myocardial protection of a novel histone deacetylase inhibitor against hypoxia injury