通过NF-κB调控蛋白激酶SPAK通路促进NR8383细胞炎症介质释放及氧化应激发生

目的分析SPAK在高渗透压应激所致大鼠肺泡世噬细胞系(NR8383)细胞炎症介质释放及氧化应激发生中的作用。 方法在细胞培养液中加入核因子κB(nuclear factor κappa-B, NF-κB)的抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸(1-Pyrrolidinecarbodithioic acid, PDTC)阻断其磷酸化，检测其对高渗刺激引起的SPAK表达升高的抑制作用。通过siRNA干扰技术下调SPAK的表达，检测NR8383细胞炎症介质TNF-α和IL-1的分泌以及MPO活性和LDH释放，阐明SPAK在细胞应对高渗透压刺激时的调控作用。 结果高渗透压刺激可以导致NR8383细胞中的NF-κB的磷酸化并上调SPAK蛋白表达，而通过对NR8383细胞进行PDTC预处理，NF-κB的磷酸化及SPAK蛋白表达水平可以显著受到抑制。而SPAK表达下调可以减轻高渗刺激所致的炎症因子释放增加，降低MPO活性以及H₂O₂浓度。 结论磷酸化NF-κB可以调控SPAK转录及翻译，而SPAK可以通过促进炎性介质释放、诱导氧化应激参与到高渗透压刺激的调控中。