| 新型超耐热菌的单链DNA结合蛋白表达和纯化及其增强DNA、cDNA的合成 |
| |
| 引用本文： | 贾晓伟,张国辉,史海燕. 新型超耐热菌的单链DNA结合蛋白表达和纯化及其增强DNA、cDNA的合成[J]. 中华实验和临床病毒学杂志, 2012, 26(6): 464-466 |
| |
| 作者姓名： | 贾晓伟 张国辉 史海燕 |
| |
| 作者单位： | 1. 300450,天津市第五中心医院肝胆外科
2. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 |
| |
| 摘 要： | 目的 表达和纯化一种新的来自于超耐热菌(thermococcus kodakarensis) KOD1的单链DNA结合蛋白(缩写为kod-ssb),并探讨其对DNA、cDNA合成的影响.方法 采用Transrtta(DE3)表达kod-ssb,用镍柱亲和层析纯化,经SDS-PAGE分析检测表达纯化后的kod-ssb.使用PCR及qRT/qPCR检测kod-ssb对DNA、cDNA合成的影响.结果 将质粒pET11a-kod转化Transetta(DE3)中,得到重组菌株Transetta(pET11a-kod),经IPTG诱导.由SDS-PAGE分析可见表达的约40×103的特异条带；使用人类β球蛋白基因作为模板分别扩增5 kbp,9 kbp和13 kbp目的片段,结果加了kod-ssb的PCR目的片段比没加的产量高很多,而且kod-ssb显著降低了PCR反应的非特异性扩增.以流感细胞培养上清抽提的RNA为模板,实施RT-/qPCR反应.结果加kod的平均Ct值是19.42,而没加的为22.15.结论 kod-ssb在未来将被用于增强DNA和cDNA的合成.
|
| 关 键 词： | 热球菌属 DNA 聚合酶链反应 |
Expression and purification of a novel thermophilic bacterial single-stranded DNA-binding protein and enhancement the synthesis of DNA and cDNA |
| |
| JIA Xiao-wei , ZHANG Guo-hui , SHI Hai-yan. Expression and purification of a novel thermophilic bacterial single-stranded DNA-binding protein and enhancement the synthesis of DNA and cDNA[J]. Chinese journal of experimental and clinical virology, 2012, 26(6): 464-466 |
| |
| Authors: | JIA Xiao-wei ZHANG Guo-hui SHI Hai-yan |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Thermococcus DNA Polymerase chain reaction |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
