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| 半夏试管块茎银染mRNA差异显示条件的建立及优化 | |
| 引用本文： | 薛建平,黄月琴,徐有明,田振东. 半夏试管块茎银染mRNA差异显示条件的建立及优化[J]. 中国中药杂志, 2008, 33(19): 2170-2174 |
| 作者姓名： | 薛建平 黄月琴 徐有明 田振东 |
| 作者单位： | 1. 淮北煤炭师范学院,生命科学学院资源植物生物学安徽省重点实验室,安徽,淮北,235000 2. 淮北煤炭师范学院,生命科学学院资源植物生物学安徽省重点实验室,安徽,淮北,235000;华中农业大学,园艺林学学院,湖北,武汉,430070 3. 华中农业大学,园艺林学学院,湖北,武汉,430070 |
| 基金项目： | 国家农业科技成果转化资金资助项目，淮北市重大专项基金 |
| 摘 要： | 目的：建立半夏试管小块茎DDRT-PCR反应最佳体系，为进一步研究半夏试管小块茎相关基因表达提供技术参考。方法：以半夏试管苗的叶柄﹑试管小块茎为材料，利用正交试验设计，研究模板。Mg2+，dNTPs，引物和DNA聚合酶等因素，对DDRT-PCR反应体系的影响。结果与结论：20 μL 的反应体系中含有dNTPs 150 μmol·L-1，Taq酶0.6 U，锚定引物2 μmol·L-1 ,随机引物1 μmol·L-1，Mg2+ 2.5 mmol·L-1，2 μL 10×buffer和2.5 μg的cDNA模板。各因素影响程度依次为Taq酶＞cDNA 模板＞dNTPs＞Mg2+＞引物。 |
| 关 键 词： | 半夏 试管块茎 DDRT-PCR 正交优化 非变性PAGE 银染 |
| 收稿时间： | 2007-12-12 |
Establishment and optimization of sliver staining differential display of microtubers from Pinellia ternata in vitro |
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| XUE Jian-ping; HUANG Yue-qin; XU You-ming; TIAN Zheng-dong. Establishment and optimization of sliver staining differential display of microtubers from Pinellia ternata in vitro[J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2008, 33(19): 2170-2174 | |
| Authors: | XUE Jian-ping HUANG Yue-qin XU You-ming TIAN Zheng-dong |
| Abstract: | Objective: In this study,orthogonal design was used to optinize DDRT-PCR amplification system on Pinellia ternata microtubers in vitro in five factors four levels respectively.Method: P.ternata stems and microtubers in vitro were selected as explants.The effects of five kinds of factors were studied by orthogonal design method including emplate cDNA,Mg2+,dNTPs,primers and Taq DNA polymerase,and in order to establish the optimum DDRT-PCR system of P.ternata microtubers in vitro.Result and Conclusion: A satis... |
| Keywords: | Pinellia ternata microtubers DDRT-PCR positive-cross test nonde-naturing PAGE silver straining |
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