肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因6的表达促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721的增殖和迁移

目的观察肌细胞增强因子2D（myocyte enhancer factor 2D，MEF2D）对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响，并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6（mitogen induced gene 6，MIG6）的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中MEF2D和MIG6转录水平的表达，以MEF2D mRNA表达量作为横坐标，以MIG6 mRNA表达量作为纵坐标，制作线性相关图；用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）在PLC/PRF5细胞中下调MEF2D和MIG6后，通过细胞增殖与毒性测定试剂盒（7Sea-Cell Counting Kit，7Sea-CCK）和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力；用siRNA在PCL/PRF5细胞中下调MEF2D、用MEF2D过表达质粒在SMMC7721细胞系中上调MEF2D后，通过蛋白印迹检测法分别检测MEF2D和MIG6的蛋白质表达水平。根据实验，共分为阴性对照（negative control，NC）组、siMIG6组、siMEF2D组、si2M（同时下调MIG6和MEF2D）组、空白对照组、空载对照组、MEF2D组7组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402中MEF2D mRNA、MIG6 mRNA表达水平呈现负相关关系（r=-0.78）。细胞增殖实验，24 h和48 h时，下调MIG6或MEF2D后，与NC组比较，siMIG6组或siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化；同时下调MIG6和MEF2D后，与siMEF2D组比较，si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化。72 h时，各组间方差分析差异有统计学意义（F=20.68、P<0.01）；下调MIG6后，与NC组比较，siMIG6组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著增强[光密度（optical density，OD）值为3.73±0.18，t=3.84、P=0.02]；下调MEF2D后，与NC组比较，siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著下降（OD=1.79±0.22，t=3.95、P=0.02）；同时下调MIG6和MEF2D后，与siMEF2D组比较，si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力增强（OD=2.99±0.03，t=4.83、P<0.01）。细胞划痕实验，各组间方差分析差异有统计学意义（F=42.27、P<0.01）；48 h时，下调MIG6后，与NC组比较，siMIG6组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为（51±4）%，t=3.22、P<0.05）]；下调MEF2D后，与NC组比较，siMEF2D组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著下降[细胞迁移率为（19±3）%，t=7.70、P<0.01]；同时下调MIG6和MEF2D后，与siMEF2D组比较，si2M组中PLC/PRF5细胞迁移能力增强[细胞迁移率为（46±3）%，t=6.99、P<0.01]。蛋白质印迹检测，下调MEF2D后，与NC组比较，siMEF2D组中PLC/PRF5细胞MIG6蛋白表达水平显著上升（t=7.86、P<0.001）；上调MEF2D后，与空载对照组比较，MEF2D组中SMMC7721细胞MIG6蛋白表达水平显著下降（t=4.61、P=0.004）。结论肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721中MEF2D和MIG6表达量呈负相关关系，MEF2D很可能通过负向调控MIG6的表达从而促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移。

Myocyte enhancer factor 2D promotes the proliferation and migration of hepatoma cells PLC/PRF5 and SMMC7721 by negatively regulating mitogen induced gene 6 expression