| 滇重楼鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达研究 |
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| 引用本文： | 许燕,赵爽,董栩,叶鑫.滇重楼鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达研究[J].中草药,2017,48(9):1839-1844. |
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| 作者姓名： | 许燕 赵爽 董栩 叶鑫 |
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| 作者单位： | 云南中医学院药学院, 云南 昆明 650500;云南中医学院药学院, 云南 昆明 650500;云南中医学院药学院, 云南 昆明 650500;云南中医学院药学院, 云南 昆明 650500 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（81160502）；云南省自然科学基金资助项目（2011FZ153）；云南省教育厅自然科学基金资助项目（2013J040）；云南省教育厅自然科学基金资助项目（2014J063） |
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| 摘 要： | 目的克隆滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis三萜皂苷生物合成途径中的关键酶鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因,并进行原核表达。并用Real-time PCR法检测cDNA样本中SE1基因和SE2基因的相对量。方法以滇重楼根为材料提取总RNA并反转录为cDNA。以cDNA为模板,根据转录组数据中的2组SE基因全长序列设计特异性引物,对SE基因进行克隆后转入到pEASY-T1 Simple Cloning Vector中,经测序鉴定正确后,构建pEASY-E1-SE表达载体,利用Art Media protein Expression/Amp+培养基自动诱导表达。Real-time PCR法检测cDNA样本中SE1和SE2基因的相对量。结果获得了2条滇重楼SE基因,命名为ppSE1和ppSE2。ppSE1的全长为1 932 bp,开放阅读框(ORF)为1 578 bp,编码525个AA;ppSE2的全长为1 828 bp,ORF长为1 548 bp,编码515个氨基酸。荧光定量PCR结果显示ppSE1基因和ppSE2基因在茎和叶中的表达具有显著差异,ppSE1的表达在叶中最为显著。酶切和测序结果表明,原核表达载体pEASY-E1-SE构建成功;SDS-PAGE分析显示,在BL21(DE3)表达感受态细胞中成功诱导表达了SE基因的2种融合蛋白。结论克隆了滇重楼的SE基因,获得了在体外具有生物学活性的SE蛋白。ppSE1基因和ppSE2基因在滇重楼中具有不同的表达模式,在滇重楼次生代谢产物的合成中起着不同的作用。
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| 关 键 词： | 滇重楼 鲨烯环氧酶 基因克隆 原核表达 荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 2016/11/23 0:00:00 |
Cloning and expression of squalene epoxidase from Paris polyphylla var. yunnanensis |
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| XU Yan,ZHAO Shuang,DONG Xu and YE Xin.Cloning and expression of squalene epoxidase from Paris polyphylla var. yunnanensis[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs,2017,48(9):1839-1844. |
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| Authors: | XU Yan ZHAO Shuang DONG Xu and YE Xin |
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| Institution: | School of Pharmacy, Yunnan University of TCM, Kunming 650500, China;School of Pharmacy, Yunnan University of TCM, Kunming 650500, China;School of Pharmacy, Yunnan University of TCM, Kunming 650500, China;School of Pharmacy, Yunnan University of TCM, Kunming 650500, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Paris polyphylla Smith var yunnanensis (Franch ) Hand -Mazz squalene epoxidase gene clone prokaryotic expression fluorescence quantitative PCR |
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