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| 慢病毒载体介导RNA干扰体外抑制人胰腺癌细胞增殖诱导配体的表达 | |
| 引用本文： | 王峰,陈琳,邵建国,毛振彪.慢病毒载体介导RNA干扰体外抑制人胰腺癌细胞增殖诱导配体的表达[J].第二军医大学学报,2008,29(1):0053-0058. |
| 作者姓名： | 王峰 陈琳 邵建国 毛振彪 |
| 作者单位： | 1. 南通大学附属医院检验科,南通,226001 2. 南通市第三人民医院检验科,南通,226006 3. 南通市第三人民医院消化内科,南通,226006 4. 南通大学附属医院消化内科,南通,226001 |
| 摘 要： | 目的:观察慢病毒表达载体介导的RNA干扰(RNAi)对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)表达的影响,为后续的以APRIL基因为靶点的胰腺癌基因治疗研究奠定基础.方法:应用基因工程技术,筛选出3条针对APRIL基因的RNAi靶序列,分别与pGCL-GFP载体连接,构建3个重组慢病毒表达载体LV-APRIL shRNA1、LV-APRIL shRNA2、LV-APRIL shRNA3;将连接产物转化到DH5 α感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定.将LV-APRIL shRNA、pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度.将包装产生的3种重组慢病毒分别感染CFPAC-1细胞,实时定量PCR和Western印迹检测CFPAC-1细胞APRIL mRNA和蛋白的表达,并与未转染及空转染细胞进行比较.结果:3个慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度分别为5×107、6×107、4×107 TU/ml.感染CFPAC-1细胞后,APRIL基因mRNA和蛋白的表达量与未感染慢病毒的细胞组及空载体感染组相比均明显下降(P＜0.05),其中LV-APRIL shRNA1、LV-APRIL shRNA2作用较明显,使mRNA表达分别下降73%和68%,蛋白表达分别下降66%和59%(P＜0.05);而未感染慢病毒的细胞组与空载体组相比无统计学差异.结论:成功构建针对APRIL基因的3个慢病毒载体LV-APRILshRNA,体外感染CFPAC-1细胞后可有效抑制APRIL基因和蛋白的表达. |
| 关 键 词： | 增殖诱导配体 RNA干扰 慢病毒 胰腺癌 |
| 文章编号： | 0258-879X（2008）01-0053-06 |
| 收稿时间： | 2007-09-10 |
| 修稿时间： | 2007-12-06 |
Inhibitory effects of lentiviral vector-mediated RNA interference on proliferation-inducing ligand expression in human pancreatic cancer in vitro |
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| WANG Feng,CHEN Lin,SHAO Jian-guo,MAO Zhen-biao.Inhibitory effects of lentiviral vector-mediated RNA interference on proliferation-inducing ligand expression in human pancreatic cancer in vitro[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2008,29(1):0053-0058. | |
| Authors: | WANG Feng CHEN Lin SHAO Jian-guo MAO Zhen-biao |
| Abstract: | |
| Keywords: | a proliferation-inducing ligand RNA interference lentivirus pancreatic cancer |
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