| 体外构建工程化汗腺类器官的初步研究 |
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| 作者姓名： | 陈润开 付小兵 孙晓艳 |
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| 作者单位： | 天津医科大学研究生院,天津 300070;解放军总医院医学创新研究部创伤修复与组织再生研究中心,北京 100853;解放军总医院第四医学中心组织修复与再生全军重点研究实验室,北京 100048;解放军总医院医学创新研究部创伤修复与组织再生研究中心,北京 100853;解放军总医院第四医学中心组织修复与再生全军重点研究实验室,北京 100048 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;学科建设项目;军队十三五重大;国家重点研发计划 |
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| 摘 要： | 目的应用谱系重编程技术将表皮角质细胞转分化为汗腺样细胞,并在体外构建三维培养体系,诱导工程化的汗腺样细胞自组装为汗腺类器官,以实现汗腺功能性修复。方法采用CRISPR/dCas9系统上调内源性外胚层发育不全(EDA)基因在人永生化表皮角质(HaCaT)细胞中的表达,筛选阳性克隆后进行诱导培养。将细胞分为HaCaT组(HaCaT细胞使用汗腺培养基培养)、HaCaT+Dox组(HaCaT细胞使用含5 μg/ml Dox的汗腺培养基培养)、HaCaT-E组(HaCaT-E细胞使用汗腺培养基培养)、HaCaT-E+Dox组(HaCaT-E细胞使用含5 μg/ml Dox的汗腺培养基培养),采用RT-PCR及Western blotting检测EDA基因在各组细胞中的表达水平,以验证质粒转染是否成功。另将细胞分为HaCaT-E组(汗腺培养基组)及HaCaT-E+Dox组(汗腺培养基+5 μg/ml Dox组),利用免疫荧光染色鉴定汗腺表面标记物的表达水平,以验证HaCaT细胞是否成功重编程为汗腺样细胞。随后以Matrigel为主体支架模拟汗腺发育微环境,在体外诱导汗腺样细胞自组装形成汗腺类器官,...
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| 关 键 词： | 谱系重编程 类器官 汗腺再生 创伤修复 |
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