氧化苦参碱通过Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌HCT116细胞凋亡和焦亡作用研究

目的 探究氧化苦参碱诱导结肠癌HCT116细胞死亡的作用机制。方法 将结肠癌HCT116细胞随机分为对照组和氧化苦参碱（2、4、8、12、16、20、30、40 mmol·L^-1）组，通过CCK-8法检测各浓度氧化苦参碱作用24、48 h对结肠癌细胞存活率的影响；光学显微镜下观察氧化苦参碱（15、20、25 mmol·L^-1）对HCT116细胞形态的影响；通过Hoechst染色法和Annexin V/PI双染流式细胞术法观察氧化苦参碱对HCT116细胞凋亡的影响；JC-1染色观察细胞线粒体膜电位的变化；Western blotting法检测各组细胞成熟体半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、BCL2关联X蛋白（Bax）、细胞色素C （Cyt-C）、消化道皮肤素E （GSDME）、细胞周期蛋白1（cyclin-D1）、骨髓细胞瘤病毒癌基因（c-Myc）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）、β-连环素（β-catenin）、生存素（survivin）的蛋白表达情况。结果 与对照组比较，氧化苦参碱可以明显降低HCT116细胞的存活率，且存在剂量及时间相关性，作用24、48h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为18.80、10.75 mmol·L^-1；氧化苦参碱组形状正常的HCT116细胞明显减少，均出现部分类圆球形的细胞，并且折光率明显降低；经Hoechst染色后氧化苦参碱组HCT116细胞的蓝色荧光明显加深，且相对集中，流式细胞术结果显示细胞凋亡率显著增加（P<0.05、0.01）；JC-1染色结果表明氧化苦参碱可以降低HCT116细胞线粒体膜电位；氧化苦参碱组Bcl-2、β-catenin、c-Myc、cyclin D1和survivin蛋白表达水平显著下降（P<0.05、0.01），Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Cyt-C、GSDME蛋白表达水平及Bax/Bcl-2显著上升（P<0.05、0.01）。结论 氧化苦参碱可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路，促进线粒体依赖的细胞内源性凋亡和细胞焦亡发挥抗结肠癌作用。