miR-124对Müller细胞转分化机制的影响

目的 探讨过表达miR-124对Müller细胞转分化机制的影响。方法 构建pSuper-EGFP-miR-124质粒并测序验证,获得miR-124的过表达载体。并用其转染Müller细胞系,用G418进行筛选,获得Müller细胞稳转株,将样本送基因芯片检测。利用TargetScan和miRBase Targets数据库预测差异表达明显的miR-124靶基因,通过Real-Time PCR和荧光素酶活性测定实验验证分析miR-124的靶基因,筛选变化比较显著的基因进一步研究。miR-124转染Müller细胞,提取mRNA和蛋白,采用Real-Time PCR、Western印迹法检测相关基因的变化。结果 成功构建pSuper-EGFP-miR-124质粒并获得了稳定转染的Müller细胞系。荧光素酶报告分析表明,miR-124与STAT3(signal transducers and activators of transduction-3, STAT3) 3′UTR相互作用。体外结果显示,pSuper-miR124转染Müller细胞后,STAT3表达下降并开始表达光感受器细胞标志物CRX(Cone-Rod Homeobox, CRX)和RCVRN(Recoverin, RCVRN)。结论 miR-124可能通过下调STAT3,上调CRX和RECVN,诱导Müller细胞向感光细胞转分化。