| 改造的sTRAIL基因在重组毕赤氏酵母菌中的表达及活性分析 |
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| 引用本文： | 朱明月,沈文涛,周鹏. 改造的sTRAIL基因在重组毕赤氏酵母菌中的表达及活性分析[J]. 药物生物技术, 2007, 14(1): 5-9 |
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| 作者姓名： | 朱明月 沈文涛 周鹏 |
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| 作者单位： | 1. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所/热带作物生物技术国家重点实验室,海南,海口,571101;海南医学院分子生物学重点实验室,海南,海口,571101
2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所/热带作物生物技术国家重点实验室,海南,海口,571101 |
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| 摘 要： | 利用甲醇毕赤氏酵母系统对改造的TRAIL基因进行优化表达研究及产物活性分析,确定改造后的基因表达量是否提高。应用电转化技术将4种重组表达载体转化毕赤氏酵母菌GS115,经Zeocin抗生素筛选、PCR检测获得阳性酵母工程菌,采用摇瓶发酵及SDS-PAGE进行高效表达菌株的筛选,经CM-柱层析、Western blot及MTT法对重组蛋白进行初步纯化、抗原活性检测和生物学活性分析,确定了最佳摇瓶发酵条件:培养基最适pH值5.5~6.5,最佳甲醇诱导浓度为1%,最适甲醇诱导周期为96h。筛选到高效表达菌株pPICZα-A-sTRAIL/GS115、pPICZα-A-sTRAILK/GS115、pPICZα-A-sTRAILA/GS115、pPICZα-A-sTRAILAK/GS115,其表达量分别达到67,113.4,98,145mg/L,改造后的TRAIL具有抗原活性和生物学活性。对TRAIL基因的改造可以提高其在甲醇毕赤氏酵母系统中的表达。
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| 关 键 词： | 毕赤氏酵母 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 高效表达 活性分析 |
| 文章编号： | 1005-8915（2007）01-0005-05 |
| 修稿时间： | 2006-07-06 |
Expression and Activity Analysis of Modified sTRAIL Gene in Recombinant P. Pastoris |
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| ZHU Ming-yue,SHEN Wen-tao,ZHOU Peng. Expression and Activity Analysis of Modified sTRAIL Gene in Recombinant P. Pastoris[J]. Pharmaceutical Biotechnology, 2007, 14(1): 5-9 |
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| Authors: | ZHU Ming-yue SHEN Wen-tao ZHOU Peng |
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| Affiliation: | 1. Institute of Tropical Biology Science, CA TAS,Haikou 571101, China 2. Key laboratory of molecular biology of Hainan Medical College, Haikou 571101, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | P.pastoris TRAIL High-effective expression Bio-activity |
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