抗中性粒细胞胞浆抗体相关抗原诱导人胎肾内皮细胞凋亡的研究

目的　探讨抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA)相关抗原蛋白酶 3(PR 3)对体外培养人胎儿肾小球内皮细胞凋亡的影响及诱导机制。方法　采用ANCA阳性系统性红斑狼疮 (SLE)患儿外周血中性粒细胞分离纯化其细胞质中PR 3 ,并用该蛋白酶诱导培养人胎肾内皮细胞发生凋亡。观察不同剂量PR 3于不同时间点对内皮细胞存活情况及其形态学变化的影响。用碘化丙啶染色DNA以评价凋亡的发生率 ,观察核染色质固缩及DNA片段的形成。用琼脂糖凝胶电泳确定凋亡小体的形成和凋亡梯形。结果　ANCA阳性SLE患儿中性粒细胞胞浆蛋白酶PR 3以剂量、时间依赖性形式诱导人胎肾内皮细胞发生凋亡 [PR 3 10 μg·ml-1·2 4h-1细胞凋亡率为 (75 5± 2 6 5 ) % ],与阴性对照组 [(1 8± 1 2 ) % ]比较差异有显著性 (P <0 0 1)。凋亡的内皮细胞与培养基分离、悬浮、呈碘化丙啶强染的大小不等的碎片 ,核染色体固缩。DNA电泳提示凋亡核小体形成 ,出现凋亡梯形。结论　中性粒细胞胞浆蛋白酶PR 3可诱导胎肾内皮细胞凋亡 ,在ANCA相关性血管炎性疾病的发生发展中可能具有重要的病理生理意义

Apoptosis of human fetal glomerular endothelial cell induced by neutrophil proteinase 3 from ANCA positive children with SLE