补阳还五汤及拆方影响脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白的表达

背景：补阳还五汤是一种临床上常用的治疗缺血性脑血管疾病的中药，其作用机制还有许多不明之处。目的：观察补阳还五汤及拆方对脑缺血再灌注SD大鼠模型细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响及其作用机制，并研究方剂配伍的意义。设计：随机对照的动物实验。单位：河南中医学院第一附属医院神经内科。材料：实验在河南省中医药研究院国家中医管理局三级实验室进行。选择上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供的清洁级SD大鼠60只，月龄4～5个月；雌雄各半，雌性260～310g，雄性280～330g。活血组药物选用当归120g，桃仁60g，川芎60g，加水1440mL，提取挥发油，备用。药渣及提取液加入赤芍120g，地龙60g，红花60g，再加入1440mL水，煎煮1h，滤过，药渣再加入2880mL水，煎煮1h，滤过，合并两次煎液，浓缩至1200mL，加入挥发油及吐温-80 3mL，混匀，即得。黄芪组药物选用黄芪1200g，加水7200mL，煎煮两次，每次1h，滤过，合并煎液，浓缩至600mL，加入吐温-80 2mL，即得。补阳还五汤组选用当归60g，桃仁30g，川芎30g，加水720mL，提取挥发油，备用。药渣及提取液加入黄芪1200g，赤芍60g，地龙30g，红花30g，再加入920mL水，煎煮1h，滤过，药渣再加入8640mL水，煎煮1h，滤过，合并两次煎液，浓缩至600mL，加入挥发油及吐温-803mL，混匀，即得。（黄芪组和补血组药物为补阳还五汤的拆方。）活血组药物每毫升相当生药0．4g，黄芪组药物每毫升相当于生药2g，全方组药物相当于生药2．4g。方法：将60只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、活血组、黄芪组、总方组，每组分别为12只。每只SD大鼠分别通过灌胃给药：活血组8g／kg、黄芪组40g／kg、总方组48g／kg，假手术组及模型组分别给予生理盐水20mL／kg。通过四血管结扎法制作脑缺血再灌注模型。采用缺口末端标记法原位检测凋亡细胞（TUNEL），应用免疫组化法测定Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表达。主要观察指标：①各组SD大鼠脑组织神经元细胞凋亡水平的比较；②各组SD大鼠脑组织神经元Bcl-2、Bax阳性细胞表达水平的比较。结果：①各组SD大鼠脑组织神经元细胞凋亡水平比较：与假手术组相比，其他各组细胞凋亡明显增加（t=6．07～11．70，P〈0．01）；与模型组相比，活血组、黄芪组细胞凋亡减少（t=2．71，2．06，P〈0．05），总方组减少明显（t=5．34，P〈0．01）。②各组SD大鼠脑组织神经元Bcl-2、Bax阳性细胞表达水平的比较：与假手术组相比．活血组、黄芪组、总方组Bcl-2染色阳性细胞的表达增多（t=4．59～8．82．P〈0．01）．Bax阳性细胞表达更加明显（t=4．59～8．55，P〈0．01）；与模型组相比，活血组、黄芪组、总方组Bcl-2染色阳性细胞的表达增多（t=3．48～7．75，P〈0．01）．Bax阳性细胞的表达降低（t=3．83～5．88，P〈0．01）。活血组药物作用与黄芪组差异无显著性（P〉0．05），总方组药物作用与黄芪组、活血组差异极具显著性（P〈0．01）。结论：补阳还五汤及拆方通过抑制细胞凋亡的作用，达到抗脑缺血再灌注损伤的作用。黄芪组和活血组即拆方的协同作用，使总方组发挥最大的疗效。

Influences of Buyanghuanwu decoction and its decomposed formulas on cell apoptosis and expressions of Bcl-2 and Bax protein in rats with cerebral ischemia/reperfusion