| Ⅰ型HEVORF3-pEGFPN1真核表达质粒的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 刘曦,田德英,章述军,贾昱娴.Ⅰ型HEVORF3-pEGFPN1真核表达质粒的构建与鉴定[J].中西医结合肝病杂志,2009,19(3):151-153. |
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| 作者姓名： | 刘曦 田德英 章述军 贾昱娴 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科,湖北,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 湖北省科技攻关项目，武汉市科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建表达Ⅰ型HEV ORF3-pEGFPN1融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的LO2细胞系.方法:从猕猴胆汁提取RNA,利用RT-PCR及PCR技术从HEV基因组中扩增出ORF3基因片断,EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切后连接到经同样酶切的pEGFPN1真核表达载体,转化DH5a菌株感受细胞,获得阳性重组质粒ORF3-pEGFPN1.将阳性克隆用脂质体法转染LO2细胞系,G418筛选抗性克隆,SDS-PAGE、Western blot 分析鉴定ORF3-pEGFPN1融合蛋白的表达.结果:真核表达质粒转染LO2细胞,SDS-PAGE显示在39.8kD左右蛋白表达量明显高于对照组,Western blot在39.8kD左右有一条强的棕色条带.结论:成功构建ORF3-pEGFPN1真核表达质粒,能在LO2细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定基础.
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| 关 键 词： | 肝炎病毒 戊型 真核表达 融合蛋白 |
Cloning idetification and eukaryotic expression of genetype 1 HEV ORF3 in LO2 cell line |
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