口蹄疫病毒多抗原表位基因融合表达产物的抗原性分析

目的:筛选出高抗原性的口蹄疫病毒(FMDV)抗原表位组合体, 为能有效启动细胞免疫、高广谱性的口蹄疫植物疫苗的研究提供研究基础.方法:通过化学方法合成O、 A型口蹄疫病毒的5个T细胞表位基因和2个B细胞表位基因单链, 采用套叠PCR的方法将T或是B细胞表位基因分别融合成融合体T或B, 利用同尾酶的性质将融合体T和B连接成3种不同融合方式的串连体, 即5′-T-B-T-3′、 5′-T-T-B-3′和5′-B-T-T-3′; 利用马铃薯X病毒(potato virus X, PVX)载体在烟草叶片中表达各串连体基因、融合体T基因、融合体B基因和O型口蹄疫病毒的VP1基因; RT-PCR检测各基因在烟草(N.benthamiana)叶片中的转录水平; 间接ELISA及Western Dotblot 检测表达产物的抗原性.结果:各抗原基因在烟草叶片中成功获得了表达, 表达产物的抗原性因不同的融合方式而呈现差异, 其中以5′-T-B-T-3′的融合方式为最高, 5′-B-T-T-3′次之, 再是5′-T-T-B-3′, 但都高于VP1基因的表达产物, 更高于融合体T或B基因的表达产物.结论:通过融合口蹄疫病毒的多个表位基因有可能找到一种研制有效启动细胞免疫反应广谱抗口蹄疫病毒的基因工程疫苗的方法, 且T、 B细胞表位的不同组合方式对免疫活性很可能存在一定的影响.

Analysis of the antigenicity of the expression product of fusion antigen epitope genes of FMDV