| 摘 要： | 目的探讨p300/CBP相关因子(PCAF)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用及机制。方法组织块贴壁法获取大鼠原代VSMCs,使用Ad-PCAF RNAi腺病毒转染VSMCs抑制PCAF表达。选择1μg/mL的脂多糖(LPS)作为VSMCs增殖诱导剂。将实验分为6组:对照组(A组)、对照组+1μg/mL脂多糖刺激组(B组)、Ad-GFP腺病毒转染组(C组)、Ad-GFP腺病毒转染+1μg/mL脂多糖刺激组(D组)、Ad-PCAF RNAi腺病毒转染组(E组)、Ad-PCAF RNAi腺病毒转染+1μg/mL脂多糖刺激组(F组),使用CCK-8和流式细胞周期检测细胞增殖情况,各组中PCAF表达采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测,蛋白免疫印迹法检测各组丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)表达水平。结果 1μg/mL脂多糖明显促进VSMCs增殖;同时,下调PCAF表达后,VSMCs增殖活性明显降低(P0.05)。流式细胞周期检测结果显示,脂多糖可促进VSMCs由S期向G2期转化,而下调PCAF后可明显抑制脂多糖的作用(P0.05)。同时,脂多糖诱导后VSMCs中PCAF mRNA表达水平明显增强;转染Ad-PCAF RNAi腺病毒后可明显降低VSMCs内PCAF mRNA的表达水平(P0.05)。此外,脂多糖诱导后VSMCs中p-p38 MAPK、p-AKT表达水平均明显升高(P0.05);而下调PCAF表达后,p-p38 MAPK、p-AKT表达均明显降低(P0.05)。结论下调PCAF的表达对VSMCs增殖具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制细胞内p-p38 MAPK、p-AKT表达有关。
|
