人外周血单个核细胞分泌细胞因子对α-1，3-半乳糖基转移酶基因敲除猪肝细胞的作用

目的研究异种肝细胞或肝移植中，活化的人外周血单个核细胞(h-PBMC)分泌的细胞因子对α-1，3-半乳糖基转移酶基因敲除猪肝细胞(GalT-KO-hep)的作用。 方法利用永生化GalT-KO-hep，与经脂多糖＋聚肌胞苷酸激活的h-PBMC共培养。生化分析检测共培养上清中白蛋白、ALT、AST和尿素水平，采用流式细胞术检测GalT-KO-hep凋亡，采用蛋白质印迹法检测GalT-KO-hep中Caspase-3剪切体表达以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)、核因子κB(NF-κB)、P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、信号传导与活化转录因子3(STAT3)和蛋白激酶B(AKT)通路相关分子的表达变化。采用方差分析比较不同刺激时间h-PBMC分泌的细胞因子mRNA相对表达量、共培养模型不同时间点上清液生化指标含量、GalT-KO-hep中Caspase 3剪切体表达量和细胞凋亡率，进一步两两比较采用LSD法。P<0.05为差异有统计学意义。 结果GalT-KO-hep与活化h-PBMC共培养6 h组上清液中ALT含量高于共培养24 h和48 h组，差异均有统计学意义(P均<0.05)；共培养48 h组AST含量高于共培养6 h和24 h组(P均<0.05)；共培养24 h和48 h组尿素含量均高于共培养6 h组(P均<0.05)。GalT-KO-hep与活化h-PBMC共培养24 h和48 h后，细胞中Caspase 3剪切体表达增加，细胞凋亡程度逐渐增加。与活化h-PBMC共培养0.5、1、6和12 h后，GalT-KO-hep磷酸化蛋白p-STAT3、p-JNK、p-IκBα、p-P38 MAPK、p-AKT和p-ERK(1/2)均被不同程度激活。 结论h-PBMC释放的细胞因子可诱导GalT-KO-hep损伤和凋亡，并促进炎症相关分子通路的激活。

The effects of cytokines secreted by human peripheral blood mononuclear cell on α-1, 3-galactosyltransferase knockout pig hepatocytes