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| DNA修复蛋白MGMT基因的克隆及转导脐血CD34+细胞后耐药特征的研究 | |
| 引用本文： | 王季石,夏学鸣,陈子兴,卢大儒,薛京伦,阮长耿.DNA修复蛋白MGMT基因的克隆及转导脐血CD34+细胞后耐药特征的研究[J].中华医学遗传学杂志,2000,17(6). |
| 作者姓名： | 王季石 夏学鸣 陈子兴 卢大儒 薛京伦 阮长耿 |
| 作者单位： | 1. 上海医科大学华山医院血液内科博士后流动站,200040 2. 苏州医学院附属第一医院血液科,江苏省血液研究所,215006 3. 复旦大学遗传学研究所 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金!(3970 331 )，贵州省科学基金!(E97- 5) |
| 摘 要： | 目的 增强脐血CD34+造血细胞对化疗药物的耐药表型,探讨逆转录病毒介导的基因转移效率和耐药基因特性,以及在脐血造血干细胞保护性基因治疗中的作用和意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)cDNA;利用基因重组技术,将其克隆于pGEM-T质粒载体并构建了逆转录病毒载体G1Na-MGMT;应用脂质体LipofectAMINE基因转移法将后者导入GP+E86和PA317病毒包装细胞,以卡氮芥1,3-Bis(2-Chloroethyl)-1-Nitrosourea(BCNU)加压筛选后的阳性克隆上清经乒乓效应后继而感染脐血CD34+细胞.应用PCR,Southern Blot,RT-PCR,Northern blot,Western Blot及MTT法检测MGMT基因在脐血CD34+细胞中的转移和表达.结果 酶切鉴定及DNA测序证实了MGMT cDNA克隆的正确性,脂质体介导方法成功将其导入病毒包装细胞,BCNU加压筛选和乒乓感染法使病毒效价达1.6×106CFU/ml,逆转录病毒载体介导的MGMT基因在脐血造血干细胞中获得了有效转移和表达.转MGMT耐药基因脐血造血干/祖细胞对BCNU的抗药性较对照组提高了4倍.结论 DNA修复蛋白MGMT基因的克隆并导入脐血造血干/祖细胞可以明显提高靶细胞的耐药性. |
| 关 键 词： | 六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因 逆转录病毒载体 造血干细胞 基因疗法 脐血 |
In vitro study on transduction of human O6-methylguanine-DNA-methyltransferase cDNA into human umbilical cord blood CD34+ cells |
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| WANG Jishi,XIA Xueming,CHEN Zixing,LU Daru,XUE Jinglun,RUAN Changgen.In vitro study on transduction of human O6-methylguanine-DNA-methyltransferase cDNA into human umbilical cord blood CD34+ cells[J].Chinese Journal of Medical Genetics,2000,17(6). | |
| Authors: | WANG Jishi XIA Xueming CHEN Zixing LU Daru XUE Jinglun RUAN Changgen |
| Abstract: | |
| Keywords: | O~6-methylguanine DNA methyltransferase gene retrovirus vector hematopoietic stem cell gene therapy cord bl |
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