人脐静脉内皮细胞增殖、迁移与和血生络方干预的影响

目的:和血生络方是在《内经》理论指导下,由人参养荣汤化裁而成,临床治疗缺血性心脏病效果良好。实验拟进一步观察和血生络方对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及细胞周期的影响,探讨其促血管生成作用。方法:实验于2006-11/2007-04在白求恩国际和平医院中心实验室进行。和血生络方所用中药黄芪、人参、熟地、当归、白芍、丹参、降香、红景天等购自石家庄乐仁堂药店。常规煎煮,离心去杂,浓缩为1kg/L的水煎液,分别通过1.20,0.45μm的微孔滤膜过滤,最后无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤,密封分装,4℃冷藏备用。采用人脐静脉内皮细胞系ECV-304为模型。将ECV-304细胞贴壁培养24h后,分别换含0.1,0.5,1.0,2.0,4.0g/L和血生络方的RPMI-1640培养液培养,另设正常对照组。每组实验重复3次。采用四甲基偶氮唑盐法分别于药物作用24,48,72,96h检测人脐静脉内皮细胞增殖;流式细胞仪技术分析细胞DNA含量,计算细胞增殖指数;细胞划痕法检测细胞迁移。结果:①与正常对照组比较,和血生络方各浓度组(0.5～4.0mg/L)均可促进ECV-304细胞增殖(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性。②正常对照组及和血生络方固定剂量(2g/L)随作用时间的延长,内皮细胞逐渐增殖,72h达到峰值;不同时间点和血生络方组吸光度值均高于正常对照组(P<0.01)。③正常培养的ECV-304细胞周期中G0/G1期、S期及G2/M期细胞分布比例正常;和血生络方组(2g/L)G0/G1期细胞百分率较正常对照组下降(P<0.01),S期细胞百分率增高(P<0.01),而M期无明显变化。④正常对照组ECV-304细胞6h迁移率为17.49%,24h迁移率为41.32%,不同时间点和血生络方各浓度组(0.5～4.0g/L)细胞迁移率均高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),且具有剂量依赖效应。结论:和血生络方能够促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及DNA合成,提示具有促血管生成作用,可能是其防治缺血性心脏病的作用机制之一。

Effects of Hexue Shengluo recipe on the proliferation and migration of human umbilical vein endothelial cells