| 小鼠ATP酶β亚单位真核表达载体的构建和细胞内定位研究 |
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| 作者姓名： | 史晓兰 冯国开 刘爱华 姜勇 |
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| 作者单位： | 1. 南方医科大学病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广州,510515
2. 南方医科大学南方医院呼吸科,广州,510515 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目(81030055); 国家自然科学基金委员会-广东省人民政府自然科学联合基金(U0632004); 长江学者和创新团队发展计划(IRT0731); “973计划”项目(2010CB529704); 高等学校博士学科点专项科研基金(20069981001); 广州市科技计划(2007J1-C0301) |
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| 摘 要： | 目的构建小鼠ATP酶β亚单位(ATPaseβ)真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞中的表达定位情况。方法取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到ATPaseβ编码序列,将其连接到pMD18-T载体上,然后以pMD18-ATPaseβ为模板扩增得到ATPaseβ编码序列,再将其克隆到真核表达载体pcDNA3/HA上。采用脂质体转染法转染NIH 3T3细胞及293细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果 PCR、双酶切和测序结果表明,重组质粒pcDNA3/HA-ATPaseβ构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位于细胞质,细胞膜上也有表达,而在293细胞中只表达于细胞质。结论成功构建了带有HA标签的小鼠ATPaseβ真核表达载体,该载体能够在哺乳动物NIH 3T3及293细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究ATPaseβ的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
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| 关 键 词： | 腺苷三磷酸酶,β亚基 遗传载体 蛋白定位 |
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