半月板碎片来源间充质干细胞样细胞的分离培养及多向分化潜能

目的:探讨半月板碎片来源间充质干细胞(MSC)样细胞的分离培养和多向分化潜能。方法:通过酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞,体外培养至第3代,显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代细胞并对其进行向成骨、成脂和成软骨诱导分化。结果:经酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞4~6天可见少量的长梭形贴壁,10~14天细胞成簇生长,克隆集落形成。第3代细胞形态较均一,生长增殖良好。成骨诱导14天后ALP和茜素红染色阳性,有矿化结节形成。成脂诱导14天后油红O染色阳性提示细胞内有脂滴形成。采用细胞微团无血清成软骨诱导21天后甲苯胺蓝染色呈阳性,细胞外有蛋白多糖形成;免疫组织化学染色示特异软骨基质Ⅱ型胶原表达阳性。结论:采用混合胶原酶消化的方法分离获得的半月板碎片来源的细胞贴壁生长,呈典型的长梭形的MSC样细胞形态,在体外适当的诱导条件下具有分化成骨、成脂、成软骨的潜能,有望成为半月板再生的种子细胞来源。

Isolation and Multi-directional Differentiation of Meniscal Debris-derived Mesenchymal Stem Cells