| His-TAT-mCherry融合蛋白的跨膜转导及其在细胞内的定位 |
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| 引用本文： | 陈茜,宋方丽,刘亚伟,杨勤,姜勇.His-TAT-mCherry融合蛋白的跨膜转导及其在细胞内的定位[J].解放军医学杂志,2009,34(2). |
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| 作者姓名： | 陈茜 宋方丽 刘亚伟 杨勤 姜勇 |
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| 作者单位： | 1. 贵阳医学院病理生理教研室,贵阳,550000
2. 南方医科大学病理生理教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家高技术研究发展计划(863计划)，广东省科技计划项目，广州市科技计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建在原核中表达的人类免疫缺陷病毒转录活化因子(HIV-TAT)红色荧光蛋白(mCherry)融合表达载体,荧光显微镜观察HW-TAT的跨膜转导及其在细胞内的定位,为进一步研究HW-TAT的跨膜转导机制及其定位提供重要工具. 方法 采用基因重组技术构建含HIV-TAT以及红色荧光蛋白的质粒pET14b-His-TAT-mCherry,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,将该质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使其在体外表达,并进行纯化、除菌.将纯化的His-TAT-mCherry融合蛋白与Hela细胞共同孵育,荧光显微镜下观察. 结果 PCR、双酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;表达纯化出了高纯度的His-TAT-mCher-ry融合蛋白.荧光显微镜下见Hela细胞中红色荧光蛋白主要分布在胞质中,细胞膜上也有一定分布. 结论 成功构建了pET14b-His-TAT-mCherry原核表达质粒,纯化了高纯度的His-TAT-mCherry融合蛋白,该蛋白在哺乳动物细胞中有跨膜转导活性,为研究HIV-TAT的跨膜转导机制提供了一个重要的工具.
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| 关 键 词： | 基因产物 tat 红色荧光蛋白 跨膜转导 |
Membrane translocation and location in cells of red fluorescent protein fusion vector incorporated HIV-TAT protein |
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| CHEN Xi,SONG Fang-li,LIU Ya-wei,YANG Qin,JIANG Yong.Membrane translocation and location in cells of red fluorescent protein fusion vector incorporated HIV-TAT protein[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2009,34(2). |
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| Authors: | CHEN Xi SONG Fang-li LIU Ya-wei YANG Qin JIANG Yong |
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