| 旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX的克隆表达及免疫学特性初步分析 |
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| 引用本文： | 周阳芳,贾飞飞,占建华,胡旭初,周兴旺.旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX的克隆表达及免疫学特性初步分析[J].广东寄生虫学会年报,2012(6):669-674. |
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| 作者姓名： | 周阳芳 贾飞飞 占建华 胡旭初 周兴旺 |
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| 作者单位： | [1]中山大学中山医学院生化教研室,广东广州510080 [2]中山大学寄生虫学教研室,广东广州510080 [3]中山大学热带病防治研究教育部重点实验室,广东广州510080 |
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| 基金项目： | 国家973发展计划（2010CB530002） |
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| 摘 要： | 目的克隆表达一个新的旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX，初步探讨其免疫学特性，为研究新的防治方法奠定科学基础。方法从GenBank旋毛虫核酸数据库中筛选出功能未知的CathepsinX基因部分EST序列。使用RACE-PCR方法得到其全长编码基因序列。半定量RT—PCR分析该基因的转录。构建该基因的原核表达载体pET30a-TsCPX，大肠杆菌中IPTG诱导表达，His—tag亲和层析纯化获重组蛋白TsCPX；将纯化的重组蛋白40斗g／只免疫BALB／c小鼠，免疫前1周及每次免疫后2周收集免疫血清，间接ELISA检测血清总IgG、亚类IgG1、IgG2a抗体浓度。结果RACE—PCR克隆出TsCPX全长基因序列，共1227bp；RT．PCR揭示TsCPX在旋毛虫三个发育时期均有380bp扩增条带，条带光密度分析显示最高转录水平出现在新生幼虫期。E．coli原核表达体系中成功克隆表达出重组蛋白TsCPX；重组蛋白免疫小鼠二次后，免疫血清总IgG迅速上升，三次免疫后达到峰值（P〈0．001）；IgG亚类IgGl抗体浓度随着免疫次数的增加迅速上升，亚类IgG2a无明显上升，两者间差异有统计学意义（P〈0．001）。结论成功克隆的TsCPX基因在旋毛虫的三个生长发育时期均有转录表达，TsCPX重组蛋白具有较强免疫原性，能引起宿主（小鼠）Th2型为主的免疫应答．具有作为旋毛虫病免疫预防研究靶分子的潜在价值。
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| 关 键 词： | 旋毛虫 组织蛋白酶X RACE—PCR克隆 重组蛋白 免疫原性 |
Cloning, expression and preliminary immunological features of a CathepsinX protease from Trichinella spiralis |
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| ZHOU Yang-fang,JIA Fei-fei,ZHAN Jian-hua,HU Xu-chu,ZHOU Xing-wang.Cloning, expression and preliminary immunological features of a CathepsinX protease from Trichinella spiralis[J].Journal of Tropical Medicine,2012(6):669-674. |
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| Authors: | ZHOU Yang-fang JIA Fei-fei ZHAN Jian-hua HU Xu-chu ZHOU Xing-wang |
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| Institution: | 1. Department of Biochemistry, Zhongshan School of Medicine of Sun Yat-sen University, Guangdong, Guangzhou 510080 ; 2.Department of Parasitology, Zhongshan School of Medicine of Sun Yat-sen University, Guangdong, Guangzhou 510080; 3.Key Laboratory for Tropical Diseases Control, Sun Yat-sen University, Ministry of Education, Guangdong, Guangzhou 510080, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Trichinella spiralis CathepsinX RACE-PCR cloning recombinant protein immunogenicity |
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