一种华支睾吸虫亲肌素样基因的克隆、表达与免疫学功能初步研究

目的对新发现的华支睾吸虫亲肌素样蛋白（CsMLP）进行克隆、原核表达，初步了解其重组产物的免疫学功能。方法应用生物信息学分析软件，分析CsMLP的序列特点和基本理化特征；将CsMLP基因克隆到原核表达质粒pET．28a（＋）中，诱导表达并用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化，用纯化的CsMLP蛋白免疫SD大鼠获得抗血清；用Westernblot进行免疫反应性及免疫原性分析；应用免疫荧光方法观察CsMLP在华支睾吸虫成虫的定位。结果该cDNA序列全长为900bp，编码190个氨基酸，具有Calponin功能域；PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET．28a（＋）-CsMLP重组质粒构建成功；SDS—PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL21／DE3中获得高效表达，分子量为21300Mr；经亲和层析获得了高纯度蛋白；重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清、感染了华支睾吸虫的SD大鼠血清识别；CsMLP主要定位于虫体富含肌肉组织的口、腹吸盘、咽部，在表膜、肠壁也有分布。结论CsMLP可在原核表达系统中呈现高效的可溶性表达，具有免疫原性．其主要分布在华支睾吸虫肌肉丰富的组织。