| 摘 要： | 目的 探索丹参多酚酸盐(SAL)对过氧化氢(H2O2)所致H9c2心肌细胞线粒体的保护作用及其机制。方法 以100μmol/L的H2O2干预对数生长期H9c2细胞4 h建立心肌细胞氧化损伤模型,设H2O2组、SAL(50、100、200 mg/L)组;另取对数生长期H9c2细胞设为正常组。药物干预24 h后,通过激光扫描共聚焦显微镜观察线粒体形态,通过透射电子显微镜观察线粒体超微结构;Jc-1荧光探针法检测膜电位(△ψm),检测膜通透性转换孔(MPTP)开放度;DCFH-DA探针法检测细胞活性氧(ROS)含量, Western blot法检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、磷酸化Drp1(p-Drp1)、细胞色素C(Cyt C)蛋白;比色法检测Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性及三磷酸腺苷(ATP)含量;原子化学发光法检测钙离子(Ca2+)浓度;硫代巴比妥酸法检测线粒体丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化法、钼酸铵法分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性。结果 (1)五组细胞线粒体平均面积比较,差异有统计学意义(F=52.076, P 0.05)。与H2O2组比较,SAL 100、200μg/mL组H9c2细胞线粒体分裂明显减少,线粒体平均面积升高(P 0.05),与SAL 50μg/mL组比较,SAL 100μg/mL组线粒体平均面积显著增加(P 0.05),与SAL 100μg/mL组比较,SAL200 mg/L组线粒体平均面积显著增加(P 0.05)。(2)与H2O2组比较,SAL 100、200μg/mL组线粒体超微结构病变明显改善。(3)与H2O2组比较,SAL 100、200 mg/L组H9c2细胞ROS含量显著降低(P 0.05);与SAL 100 mg/L组比较,SAL 200 mg/L组ROS含量显著降低(P 0.05)。(4)与H2O2组比较,SAL 100、200 mg/L组H9c2细胞线粒体△ψm显著升高且MPTP开放度显著降低(P 0.05);与SAL 50 mg/L组和SAL 100 mg/L组比较,SAL 200 mg/L组△ψm显著升高且MPTP开放度显著降低(P 0.05)。(5)与H2O2组比较,SAL 100、200 mg/L组H9c2细胞Drp1、p-Drp1、Cyt C表达明显下调(P 0.05),且p-Drp1/Drp1显著降低(P 0.05);与SAL 100 mg/L组比较,SAL 200 mg/L组p-Drp1、Cyt C表达明显下调(P 0.05)。(6)与H2O2组比较,SAL 100、200 mg/L组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性和ATP含量显著升高且Ca2+浓度显著降低(P 0.05);与SAL 50 mg/L组比较,SAL 100 mg/L组Ca2+-Mg2+-ATP酶活性和ATP含量显著升高(P 0.05),SAL 200 mg/L组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性和ATP含量显著升高且Ca2+浓度显著降低(P 0.05);与SAL 100 mg/L组比较,SAL 200 mg/L组ATP含量显著升高且Ca2+浓度显著降低(P 0.05)。(7)与H2O2组比较,SAL 100、200 mg/L组MDA含量显著降低而SOD、CAT活性显著升高(P 0.05);与SAL 50 mg/L组比较,SAL 200 mg/L组MDA含量显著降低而SOD、CAT活性显著升高(P 0.05);与SAL 100 mg/L组比较,SAL 200 mg/L组MDA含量显著降低而CAT活性显著升高(P 0.05)。结论SAL对H2O2所致H9c2心肌细胞线粒体结构和功能损伤具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活性、抑制Drp1磷酸化和抑制Ca2+超载有关。
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