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| 幽门螺杆菌空泡形成细胞毒素A亚单位的克隆表达和P37抗体的制备 | |
| 引用本文： | 杨贵珍,刘钟滨,袁建平,胡宝瑜,时晓东,郭晓奎.幽门螺杆菌空泡形成细胞毒素A亚单位的克隆表达和P37抗体的制备[J].胃肠病学,2006,11(9):542-546. |
| 作者姓名： | 杨贵珍 刘钟滨 袁建平 胡宝瑜 时晓东 郭晓奎 |
| 作者单位： | 1. 上海中医药大学病原生物学教研室,201203 2. 同济大学医学院病原生物学教研室 3. 上海交通大学医学院病原生物学教研室 |
| 摘 要： | 背景:空泡形成细胞毒素A(VacA)是幽门螺杆菌(H.pylori)的重要致病因子,研究VacA的致病机制有助于进一步明确H.pylori的致病机制。目的:原核表达H.pyloriVacA亚单位P37和P58,制备P37多克隆抗体并分析其活性。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增H.pylorivacA基因的p37和p58片段,克隆入原核表达载体pQE31,构建重组质粒pQE31-p37和pQE31-p58,转化大肠杆菌(E.coli)M15,诱导蛋白表达。以镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化融合蛋白,以纯化P37蛋白免疫家兔,获取抗P37血清,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体效价。以蛋白质印迹法(Westernblot)分析P37抗体与VacA的结合能力,观察P37抗体对VacA致胃癌细胞空泡化的抑制作用。结果:十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,E.coliM15经诱导后表达相对分子质量分别为37kDa(1Da=0.9921u)和58kDa的P37和P58融合蛋白,经纯化后为单一蛋白。纯化P37蛋白免疫家兔后获得的抗P37血清抗体效价为1×106。P37抗体能中和VacA阳性H.pylori分泌的VacA,抑制VacA对胃癌细胞的空泡化作用。结论:本实验成功构建了原核表达载体pQE31-p37和pQE31-p58,获得了高纯度单一蛋白和高效价P37抗体,该抗体具有中和VacA毒性的作用。 |
| 关 键 词： | 螺杆菌 幽门 空泡形成细胞毒素A 克隆 分子 抗体 |
| 收稿时间： | 2006-04-10 |
| 修稿时间： | 2006-07-18 |
Expression and Cloning of Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Subunits and Preparation of Antibody against P37 |
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| YANG Guizhen,LIU Zhongbin,YUAN Jianping,HU Baoyu,SHI Xiaodong,GUO Xiaokui.Expression and Cloning of Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Subunits and Preparation of Antibody against P37[J].Chinese Journal of Gastroenterology,2006,11(9):542-546. | |
| Authors: | YANG Guizhen LIU Zhongbin YUAN Jianping HU Baoyu SHI Xiaodong GUO Xiaokui |
| Abstract: | |
| Keywords: | Helicobacter pylori Vacuolating Cytotoxin A Cloning Molecular Antibodies |
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