| 人肝脏特异性miR-122重组慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 邓洁敏,邓小耿,邱荣林,伍耀豪,曾乐祥,周嘉嘉,张杰,蒋雯丽.人肝脏特异性miR-122重组慢病毒载体的构建与鉴定[J].广东医学,2015(2):169-173. |
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| 作者姓名： | 邓洁敏 邓小耿 邱荣林 伍耀豪 曾乐祥 周嘉嘉 张杰 蒋雯丽 |
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| 作者单位： | 中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科 广州510120 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的构建microRNA-122(miR-122)的重组过表达慢病毒,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定,为进一步研究miR-122的功能和作用机制奠定基础。方法利用PCR法扩增人类基因组DNA中miR-122发夹前体结构RNA,并将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经酶切及基因测序鉴定,将阳性重组PCDH-CMV-miR-122-EF1a-GFP-puro表达载体、p CMV-VSV-G和p CMVdR8.91三质粒共转染到HEK-293T细胞,收获上清液,将所得病毒悬液浓缩后梯度稀释后感染HEK-293T细胞,并利用绿色荧光蛋白进行病毒滴度测定。将重组慢病毒转染原代培养人皮肤成纤维细胞,并利用实时定量PCR检测miR-122的表达。结果重组慢病毒表达载体PCDH-CMV-miR-122-EF1a-GFP-puro酶切及测序鉴定证明载体构建成功,并得到滴度为3×108TU/m L的病毒液。病毒感染人皮肤成纤维细胞后miR-122表达明显增强。结论通过优化miRNA载体构建方法成功构建人miR-122的重组慢病毒载体并可在人类成纤维细胞内显著过表达miR-122,为miR-122的研究提供更高效稳定的基因载体。
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| 关 键 词： | miR-122 慢病毒 载体构建 |
Construction and identification of the human liver-specific miR-122 recombinant lentivirus |
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| DENG Jie-min,DENG Xiao-geng,QIU Rong-lin,WU Yao-hao,ZENG Le-xiang,ZHOU Jia-jia,ZHANG Jie,JIANG Wen-li.Construction and identification of the human liver-specific miR-122 recombinant lentivirus[J].Guangdong Medical Journal,2015(2):169-173. |
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| Authors: | DENG Jie-min DENG Xiao-geng QIU Rong-lin WU Yao-hao ZENG Le-xiang ZHOU Jia-jia ZHANG Jie JIANG Wen-li |
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| Institution: | DENG Jie-min;DENG Xiao-geng;QIU Rong-lin;WU Yao-hao;ZENG Le-xiang;ZHOU Jia-jia;ZHANG Jie;JIANG Wen-li;Department of Pediatric Surgery,Sun Yat-sen Memorial Hospital,Sun Yat-sen University; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | microRNA-122 lentivirus vector construction |
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