三种方法体外同步分离培养大鼠肝枯否细胞和星状细胞的比较 |
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引用本文: | 成家茂,潘志恒,谢瑶,何宏文,何义华.三种方法体外同步分离培养大鼠肝枯否细胞和星状细胞的比较[J].现代消化及介入诊疗,2007,12(4):220-224. |
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作者姓名: | 成家茂 潘志恒 谢瑶 何宏文 何义华 |
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作者单位: | 1. 大理学院基础医学院人体解剖学教研室,671000 2. 中山大学附属第三医院中医科,510630 3. 中山大学人体解剖学教研室,510080 |
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基金项目: | 国家中医药管理局科研项目 |
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摘 要: | 目的比较淋巴细胞分离液(LS)、Percoll液(PS)和Nycodenz液(NS)同步分离培养大鼠肝枯否细胞(KC)和星状细胞(HSC)的优缺点。方法①采用链酶蛋白酶E、胶原酶Ⅳ联合原位灌流消化,分别以LS、PS和NS的非连续密度梯度离心法同步分离培养大鼠KC和HSC。②碳素墨汁吞噬试验鉴定KC;α-SMA免疫细胞化学染色法鉴定HSC。③倒置相差显微镜下观测细胞形态,台盼蓝染色显示细胞活性,计数后计算细胞的得率、存活率和纯度。结果体外成功地同步分离培养了KC和HSC;培养的KC吞噬功能明显,而传代HSCα—SMA免疫细胞化学染色阳性者几乎达100%;采用PS或NS体外同步分离KC的细胞得率和纯度均显著高于采用LS分离细胞所得(P〈0.01),而采用NS体外同步分离肝KC的细胞存活率显著高于PS或LS分离细胞的存活率(P〈0.05);分别采用LS、PS和NS同步分离HSC,三者的细胞存活率逐次升高(P〈0.05或P〈0.01),而使用LS同步分离的细胞虽然细胞得率比较高(P〈0.05),但其细胞纯度较使用PS和NS明显降低(P〈0.05),PS和NS分离获得的HSC得率和纯度均无明显统计学差异。结论采用Percoll液和Nycodenz液体外同步分离培养大鼠肝KC和HSC效果好,且后者的细胞存活率最高。
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关 键 词: | 细胞分离 枯否细胞 肝星状细胞 细胞培养 大鼠 |
修稿时间: | 2007年11月2日 |
Comparison of three methods of isolating and cultivating synchronously rat Kupffer cell and hepatic stellate cell in vitro |
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Abstract: | |
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