砷体外诱导人Jurkat T淋巴细胞的差异表达cDNA文库的构建

目的 了解三氧化二砷(As2O3)诱导人T淋巴细胞的差异表达基因,探讨砷的免疫毒性和免疫抑制的机制。方法 在体外用As2O3处理人Jurkat T淋巴细胞(5μmol／L,24h)后,应用抑制性消减杂交技术(SSH)和克隆技术构建差异表达的cDNA文库,用聚合酶链反应技术和测序技术鉴定阳性克隆。结果 用SSH技术成功地构建了由As2O3诱导的Jurkat T淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库。经测序分析该文库含有30个基因片段,其中仅有1个是重复基因片段。与基因库的序列比较显示,这些基因序列的同源性在95％～100％。该文库的基因有：氧化代谢基因(包括磷酸丙糖脱氢酶、酰胺腺嘌呤二核苷酸4亚单位、焦磷酸合成酶、16S核糖体、琥珀酰CoA合成酶和ATP合成酶6),转录和翻译基因(包括多聚腺苷结合蛋白、泛醌素特异性蛋白酶14、核糖体蛋白：[23、核糖体蛋白S15a、真核翻译起始因子3、Rab5相互作用蛋白、剪切因子和ADP-核糖体因子6样相互作用蛋白),与氧化应激相关的基因(铁蛋白重链和高泳动类蛋白2),与细胞分化或凋亡相关基因(髓细胞分化初期应答蛋白和凋亡相关蛋白),参与蛋白活化或信号传导的基因(酪氨酸激酶、丝氨酸激酶和磷脂酰4磷接头蛋白-1相关蛋白);5个功能不详的基因是KIAA0092、CGI-147蛋白、GCI-35、核磷蛋白Nopp34和与骨骼肌部分mRNA假设蛋白同源基因。1个在基因库中无同源序列的新基因。结论 应用SSH技术成功构建了As2O3诱导T淋巴细胞差异表达基因的正向消减cDNA文库。并且发现以往在砷的研究中从未涉及的基因。基因功能分析结果提示,As2O3在诱导T淋巴细胞凋亡的过程中不但有多种基因参与,而且还有一些未知的基因也参与细胞凋亡或(和)细胞抗砷毒性作用的应答过程。

Construction of subtracted cDNA library in human Jurkat T cell line induced by arsenic trioxide in vitro