| tTS/rtTA系统下调目的基因基础表达的细胞模型研究 |
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| 引用本文： | 张若霜,帅丽芳,赵勇,陈系古.tTS/rtTA系统下调目的基因基础表达的细胞模型研究[J].中山医科大学学报,2006,27(4):361-364. |
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| 作者姓名： | 张若霜 帅丽芳 赵勇 陈系古 |
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| 作者单位： | [1]中山大学实验动物中心,广东广州510080 [2]吉林大学生物化学教研室,吉林长春130062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（103055） |
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| 摘 要： | 目的]构建带有肝脏特异性启动子和tTS沉默子的四环素调控系统,观察其在人HepG2细胞内的表达,建立严密型四环素调控系统的HepG2细胞模型.方法]通过二次分子克隆构建重组真核表达质粒载体pliv7-rtTA-tTS-Neo,用脂质体法将质粒pliv7-rtTA-tTS-Neo及pliv7-rtTA-Neo转染人HepG2细胞,经G418筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化,克隆扩增后瞬时转染pTRE-Luc质粒,强力霉素（1 mg/L）诱导表达后检测荧光素酶活性,挑选出低背景和高诱导表达的HepG2细胞克隆.结果]带有tTS的细胞株其诱导倍数明显高于不带有tTS的细胞株（192：21）,其中克隆9的诱导倍数最高（256）,获得1株高表达、低背景的HepG2/pLiv7-rtTA-tTS-Neo细胞株.结论]荧光素酶活性检测结果验证了tTS对四环素调控系统的内在泄露问题有一定的抑制作用,使四环素调控系统的开关具有真正意义上的严密性.
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| 关 键 词： | 四环素调控系统 tTS沉默子 诱导表达 HepG2细胞 |
| 文章编号： | 1672-3554（2006）04-0361-04 |
| 收稿时间： | 2006-04-30 |
Reducing Background Expression of Target Gene with tTS/rtTA System in Cell Model |
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| ZHANG Ruo-shuang, SHUAI Li-fang, ZHAO Yong, CHEN Xi-gu.Reducing Background Expression of Target Gene with tTS/rtTA System in Cell Model[J].Academic Journal of Sun Yat-sen University of Medical Sciences,2006,27(4):361-364. |
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| Authors: | ZHANG Ruo-shuang SHUAI Li-fang ZHAO Yong CHEN Xi-gu |
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| Institution: | 1. Center of Experimental Animal, SUN Yat-sen University, Guangzhou 510080; 2. Department of Biochemistry, Jilin University, Changchun, 130062, China |
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